hrvatski

Prijenosnik organskih aniona Oat3 u jetri spolno nezrelih štakora

Jetra sudjeluje u sekreciji i/ili reapsorpciji endogenih i egzogenih organskih aniona, uključujući produkte metabolizma, lijekove i toksine, posredstvom različitih transmembranskih prijenosnih proteina. Jedan od njih je prijenosnik organskih aniona 3 u štakora (rOat3) koji pripada porodici Slc22 proteina (Slc22a8). Literaturni podaci upućuju da je ekspresija mRNA za rOat3 ovisna o spolu u jetri spolno zrelih štakora, tj. značajno veća u mužjaka (M) nego li u ženki (Ž). Međutim, ekspresija mRNA za Oat3, ekspresija rOat3 proteina, te njegova stanična raspodjela u jetri spolno nezrelih štakora je nepoznata. Stoga smo ovim istraživanjima pratili ekspresiju rOat3 na razini mRNA i proteina u jetri spolno nezrelih štakora oba spola. Spolno zrele životinje (M i Ž) su upotrijebljene kao pozitivne kontrole. U tu svrhu smo odredili: 1) relativnu ekspresiju mRNA za rOat3 upotrebom RT-PCR metode, 2) relativnu ekspresiju rOat3 proteina u ukupnim staničnim membranana izdvojenim iz homogenata jetre upotrebom western analize i 3) unutarstaničnu raspodjelu rOat3 proteina u narescima fiksirane jetre upotrebom imunocitokemijske analize. Rezultati RT-PCR analize su potvrdili prethodno objavljene rezultate da je ekspresija mRNA za rOat3 ovisna o spolu u populaciji spolno zrelih štakora, tj. značajno veća u M nego u Ž. Međutim, u jetri spolno nezrelih štakora, ekspresija mRNA za rOat3 nije ovisna o spolu, tj. podjednaka je u oba spola. Rezultati western analize su pokazali da protutijelo za rOat3 obilježava jednu peptidom blokirajuću proteinsku prugu od ~50 kDa u ukupnim staničnim membranana izdvojenim iz homogenata jetre spolno zrelog M. Intenzitet bojanja proteinske pruge od ~50 kDa je značajno veći u M nego li u Ž, što sugerira na velike spolne razlike u količini rOat3 proteina u jetri spolno zrelih štakora. Nasuprot tome, relativna količina rOat3 proteina je podjednaka u oba spola u jetri spolno nezrelih štakora. Imunocitokemijska analiza je pokazala da protutijelo za rOat3 obilježava neku vrst staničnih organela u narescima fiksirane jetre spolno zrelog M. Intenzitet bojanja tih organela u jetri spolno zrelih i spolno nezrelih štakora slijedi obrazac western analize. Rezultati ovih istraživanja ukazuju da ekspresija rOat3, na razini proteina i mRNA, nije ovisna o spolu u jetri spolno nezrelih štakora, dok je u jetri spolno zrelih štakora ovisna o spolu. Također možemo zaključiti da je rOat3 eksprimiran na nekoj vrsti staničnih organela gdje pokazuje velike spolne razlike (M>Ž) na razini mRNA i proteina koje se događaju nakon puberteta.

prijenosnik organskih aniona Oat3; Slc22a8; jetra; štakor; spolne razlike; RT-PCR; western analiza; imunocitokemijska analiza

nije evidentirano