hrvatski

Mehanizam vezanja Pir porodice proteina u staničnu stijenku kvasca Saccharomyces cerevisiae

Stanična stijenka kvasca Saccharomyces cerevisiae sadrži više od dvadeset različitih manoproteina. Oni se prema mehanizmu vezanja u stijenku mogu podjeliti u tri skupine. Jedan dio proteina u staničnoj stijenci vezan je nekovalentnim vezama. Druga skupina proteina vezana je na stijenku kovalentnom vezom, a iz stijenke se može izolirati djelovanjem glukanaza. Treća, također kovalentno vezana skupina, izolira se pomoću 30 mM NaOH i sadrži Pir porodicu proteina (Pir od protein with internal repeats). Cilj ovog rada bila je studija lokalizacije Pir porodice proteina stanične stijenke, a kao model korišten je protein Ccw5p. U cilju ispitivanja polisahridne strukture na koju su Pir-proteini vezani u stijenci, provedena je ekstrakcija proteina iz stijenke hitinazom. Izolirane su tri proteinske vrpce, nazvane Ch47, Ch67 i Ch117, ali su iste tri vrpce izolirane i iz ccw5ccw6ccw7ccw8 mutanta koji ne sadrži Pir-porodicu. N-terminalno sekvenciranje proteina izoliranih hitinazom, nije dalo rezultate za proteine Ch47 i Ch67, dok je za protein Ch117 nađena sličnost s proteinima YPD koda YIL015c i YGL129c. Studijom delecijskih mutanata proteina Ccw5p, označenog HA-oznakom, u kojima nedostaje jedna, odnosno dvije kopije ponavljajuće sekvencije, nađeno je da je ova sekvencija, karakteristična za Pir-proteine, odgovorna za vezanje molekule u stijenku kvasca. Analizom prirode veze između proteina i glukana nađeno je da je ona osjetljiva na hidrolizu pomoću NaOH, te da najvjerojatnije ne sadrži molekulu fosfata.

stanična stijenka kvasca; proteini stijenke; CCW; PIR

nije evidentirano