hrvatski

Apoptotičke promjene životinjskih stanica u monosloju i suspenziji tijekom priprave biomase

U primjeni tehnologije životinjskih stanica u kulturi osim praćenja vitaliteta stanica od velike je važnosti praćenje kinetike odumiranja stanica pod određenim uvjetima. Naglom promjenom uvjeta uzgoja stanice mogu odumrijeti zbog procesa nekroze ili apoptoze. Nekroza je pasivni proces karakteriziran puknućem plazma membrane stanica i ispuštanjem staničnog sadržaja, uključujući lizozomalne enzime, u okolinu dok je apoptoza aktivni proces u kojem stanica sama sudjeluje u vlastitom uništenju, a karakterizirana je nizom morfoloških i biokemijskih promjena. Jedna od specifičnih promjena u ranoj/srednjoj fazi apoptoze je translokacija fosfatidilserina (PS) s unutrašnje strane plazma membrane na vanjsku pri čemu se PS može detektirati s obilježenim Annexinom-V koji se specifično veže za PS u prisutnosti Ca^2+ iona. U radu su korištene 2 stanične linije: suspenzijska BHK 21 C 13 i monoslojna MPK kao modeli za praćenje izazvanih apoptotičkih promjena u stanicama. Istražen je učinak 4 različita induktora apoptoze: temperaturni šok (50°C), uzgoj u hranjivoj podlozi bez dodatka seruma, dodatak aktinomicina D i deksametazona. Apoptotičke i nekrotičke promjene praćene su elektronskim i florescentnim mikroskopom te protočnim citometrom obilježavanjem stanica Annexin V-FITC-om i propidij-jodidom (PI) tj. praćenjem translokacije fosfatidilserina s unutrašnje strane plazma membrane na vanjsku. Utvrđeno je da temperaturni šok (50°C) tijekom 10-20 minuta izaziva nekrozu BHK 21 C 13 i MPK stanica. Uzgojem u hranjivoj podlozi bez dodatka seruma tijekom 24 sata, BHK 21 C 13 stanice aktivirale su apoptotički program odumiranja. Dodatak aktinomicina D (5 microg/ml) u hranjivu podlogu uzrukovao je apoptozu BHK 21 C 13 stanica tijekom 48 sati uzgoja, dok je kod MPK stanica došlo do nekroze već nakon 4 sata uzgoja. Deksametazon u BHK 21 C 13 (196, 25 microg/ml) i MPK (39, 25 microg/ml) staničnim linijama smanjio je brzinu rasta stanica, ali značajnije apoptotičke i nekrotičke promjene nisu zamijećene.

apoptoza; BHK 21 C 13 stanična linija; MPK stanična linija; protočna citometrija; fosfatidilserin (PS); Annexin V

nije evidentirano