hrvatski

Analiza izvankromosomske DNA ljudskih stanica MDA-MB-231 u kulturi

U zadnjih nekoliko desetljeća značajno se promijenio pogled na strukturu i funkciju genoma normalnih stanica. Danas se zna da je dugo uvriježeno mišljenje da je eukaritski genom relativno stabilan i konstantan krivo i da je genom zapravo fleksibilan i plastičan. S druge strane, genomska nestabilnost je fenomen koji uključuje translokacije, aneuploidiju, rekombinacije, delecije, amplifikacije gena itd., te predstavlja glavno obilježje tumorskih stanica, dok se rijetko može uočiti u normalnim stanicama. Telomere, nukleoproteinski kompleksi na krajevima eukariotskih kromososma, spriječavaju kromosomske aberacije te stoga imaju iznimno važnu ulogu u održavanju stabilnosti genoma. Izvankromososmska DNA jedan je od fenomena koju vežemo uz genomsku nestabilnost. Te male molekule DNA imaju kromososmsko podrijetlo i prisutne su u svim dosad istraživanim eukariotskim stanicama. Tumorske stanice pokazuju povečanu količina izvankromosomske DNA.Telomere stanica MDA-MB-231 analizirao sam pomoću tehnike PNA-FISH. Kromosomi su pokazivali nekoliko obilježja genomske nestabilnosti: poliploidiju, heterogeno obilježavanje telomera i prisutstvo odlomljenih dijelova kromososma. Izvankromosomsku DNA izolirao sam iz intaktnih stanica MDA-MB-231 pomoću alkalne elektroforeze u agaroznom gelu i elektroelucije. . Nakon pročišćavanja, izvankromosomsku DNA analizirao sam agaroznom gel-elektroforezom i elekrtronskom mikroskopijom.

nestabilnost genoma; izvankromosomska DNA; telomere; tumorske stanice

nije evidentirano