engleski

Expression and purification of methyltransferase Sgm

Aminoglikozidni antibiotici ubrajaju se među najčešće korištene antibiotike u kliničkoj praksi. Visok stupanj rezistencije na aminoglikozidne antibiotike u bakterija uzrokuju metilaze iz porodice Arm (Aminoglycoside resistance methyltransferase) koje metiliraju specifični nukleotida u 16S rRNA. Ovi su enzimi donedavno bili prisutni jedino kod bakterija koje proizvode aminoglikozidne antibiotike i na taj se način štite od štetnog djelovanja vlastitih metabolita, no u posljednje se vrijeme enzimi Arm sve češće nalaze i u patogenih bakterija te iznimno brzo šire horizontalnim prijenosom. Predmet istraživanja je metil-transferaza Sgm iz bakterije Micromonospora zionensis koja proizvodi antibiotik sisomicin. Cilj rada bio je optimirati heterolognu ekspresiju u bakteriji Escherichia coli i uspostaviti metodu pročišćavanja proteina Sgm. Bakterijske stanice E. coli HMS174(DE3) transformirane su ekspresijskim vektorom pET-25b(+) s kloniranim genom sgm i ekspresija je optimirana na 30 C uz koekspresiju šaperona za dobivanje veće količine topljivog proteina. Kombiniranjem afinitetne kromatografije na Ni-NTA nosaču te kromatografije na kationskom izmjenjivaču HiTrapSP optimiran je postupak pročišćavanja te je enzim Sgm pročišćen iz bakterijskog lizata. Pročišćena metil-transferaza Sgm koristit će se u budućim studijama mehanizma rezistencije na aminoglikozidne antibiotike.

amioglycoside antibiotics; bacterial resistance; methyltransferase Sgm

nije evidentirano