hrvatski

Metil-transferaza Sgm: optimiranje ekspresije u različitim sojevima bakterije Escherichia coli

Antibiotici su selektivno toksični kemijski spojevi, prvotno otkriveni kao metaboliti raznih gljivica i bakterija. Oni napadaju stanične strukture koje nisu prisutne u domaćinu ili su prisutne u drugom obliku, a ciljni patogeni su najčešće bakterije. Među najčešće korištene antibiotike ubrajamo aminoglikozide koji inhibiraju sintezu proteina. Ireverzibilno se vežu na 16S rRNA male podjedinice prokariotskog ribosoma, uzrokuju pogrešno čitanje mRNA, proizvodnju nefunkcionalnog proteina i lizu stanice. Bakterije proizvođači aminoglikozidnih antibiotika imaju mehanizam zaštite protiv vlastitog metabolita. One posjeduju metilaze iz porodice Arm (Aminoglycoside resistance methyltransferase) koje metiliraju specifične baze u mjestu vezanja na ribosom i tako sprečavaju vezanje antibiotika na ribosom. U posljednje vrijeme su metilaze iz porodice Arm primjećene u sve većem broju patogenih bakterija zbog vrlo brzog horizontalnog prijenosa gena. Predmet istraživanja je metil-transferaza Sgm iz bakterije Micromonospora zionensis. Cilj rada je optimiranje ekspresije u različitim sojevima bakterije Escherichia coli, kako bi se dobilo što više topljivog proteina Sgm za buduća istraživanja. Sojevi Rosetta(DE3)pLacI, Tuner(DE3)pLacI i ER2566 transformirani su rekombinantnim vektorom pET-25b(+)-Sgm-His koji nosi gen za metil-transferazu Sgm. Ekspresija je inducirana s dodatkom izopropil-beta-D-tiogalaktozida. Iskušavanjem dvaju različitih koncentracija induktora pri uzgoju na temperaturi od 30°C nastojalo se utjecati na intenzitet ekspresije te količinu i svojstva dobivenog proteina. Raspravljeni su ciljevi budućih istraživanja, a ovaj rad je korak u nizu studija čiji je cilj rasvjetljavanje strukture i funkcije metil-transferaze Sgm.

antibiotici; rezistencija; aminoglikozidi; metil-transferaza Sgm

nije evidentirano