Nalazite se na CroRIS probnoj okolini. Ovdje evidentirani podaci neće biti pohranjeni u Informacijskom sustavu znanosti RH. Ako je ovo greška, CroRIS produkcijskoj okolini moguće je pristupi putem poveznice www.croris.hr
izvor podataka: crosbi !

Metil-transferaza ErmC': kloniranje i ekspresija gena i pročišćavanje proteina (CROSBI ID 330865)

Ocjenski rad | magistarski rad (mr. sc. i mr. art.)

Maravić, Gordana Metil-transferaza ErmC': kloniranje i ekspresija gena i pročišćavanje proteina / Flögel, Mirna (mentor); Zagreb, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb, . 2000

Podaci o odgovornosti

Maravić, Gordana

Flögel, Mirna

hrvatski

Metil-transferaza ErmC': kloniranje i ekspresija gena i pročišćavanje proteina

Bakterijska rezistencija na antibiotike skupine makrolid-linkozamid-streptogramin B temelji se na djelovanju niza metil-transferaza iz obitelji Erm koje jednostrukom ili dvostrukom metilacijom specifičnog adenina unutar 23 S rRNA sprečavaju vezanje antibiotika na ribosom. Za istraživanje je odabrana metil-transferaza ErmC’, jedan od biokemijski stabilnijih pripadnika Erm skupine enzima. Gen ermC’ izoliran je i umnožen iz prirodnog plazmida pIM13 bakterije Bacillus subtilis BD1167 u lančanoj reakciji polimerazom. Istovremeno su na krajeve gena uvedena restrikcijska mjesta koja su omogućila njegovo kloniranje u ekspresijski vektor pET-25b(+). Rekombinantni vektor pET-25b(+)/ermC’ unijet je u ekspresijski soj E. coli BL21(DE3)pLysS. Ekspresija proteina potaknuta je dodatkom IPTG u bakterijsku kulturu i optimirana tako da udio topljivog proteina bude što veći. Iskušavanjem niza kromatografskih metoda utvrđen je optimalni postupak pročišćavanja metil-transferaze ErmC’ iz proteinskog ekstrakta bakterija. Metoda uključuje dva koraka pročišćavanja na kationskom izmjenjivaču pri čemu je protein u prvom koraku eluiran stupnjevitim koncentracijskim gradijentom NaCl, a u drugom linearnim koncentracijskim gradijentom NaCl. Opisanim postupkom dobiva se protein vrlo visoke čistoće uz dobru učinkovitost. Raspravljena su buduća istraživanja od kojih se očekuje rasvjetljavanje katalitičkog djelovanja i strukture aktivnog centra metil-transferaze ErmC’.

ErmC'; ekspresija; kloniranje; MLS antibiotici; otpornost; pročišćavanje

nije evidentirano

engleski

Methyltransferase ErmC': gene cloning and expression and protein purification

nije evidentirano

cloning; ErmC'; expression; MLS antibiotics; purification; resistance

nije evidentirano

Podaci o izdanju

87

14.04.2000.

obranjeno

Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj

Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb

Zagreb

Povezanost rada

Biologija