hrvatski

Ekspresija, pročišćavanje i imunokemijska detekcija metil-transferaze Sgm divljeg tipa i mutiranih varijanti G135A i D182A

Aminoglikozidi su antibiotici su širokog spektra čija je djelotvornost smanjena zbog pojave bakterijske rezistencije. Mehanizmi rezistencije najprije su se razvili u bakterijama koje su prirodni proizvođači antibiotika, a danas ih možemo pronaći i u patogenim sojevima. Jedan od mehanizama rezistencije je modifikacija ciljnog mjesta djelovanja antibiotika putem 16S rRNA metil-transferaza. 16S rRNA metil-transferaze spadaju u skupinu S-adenozil-metionin-ovisnih metil-transferaza. Metil-transferaza Sgm iz bakterije Micromonospora zionensis je enzim koji metilira nukleotid G1405 u 16S rRNA na maloj ribosomskoj podjedinici i tako uzrokuje rezistenciju na aminoglikozidne antibiotike. U ovom radu pripravljena je dovoljna količina čistog proteina Sgm divljeg tipa i mutiranih varijanti G135A i D182A za buduća istraživanja mehanizma enzimske reakcije i strukture aktivnog središta enzima. Indukcijom ekspresije proteina Sgm u soju E. coli C41(DE3) i liziranjem bakterijskih stanica pripravljen je proteinski ekstrakt kao ishodni materijal za pročišćavanje. Protein su pročišćeni afinitetnom kromatografijom na kolini Ni-NTA Agarose, koncentrirani ultrafiltracijom i detektirani metodom Western blot uz korištenje monoklonskog protutijela razvijenog naspram afinitetne oznake od više uzastopnih histidinskih ostataka. Rad predstavlja nužni korak koji prethodi ispitivanjima reakcijskog mehanizma metil-transferaze Sgm te prepoznavanju i oblikovanju inhibitora koji bi onemogućio bakterijsku otpornost prema aminoglikozidnim antibioticima.

Aminoglikozidni antibiotici; rezistencija; Sgm; ekspresija; pročišćavanje

nije evidentirano