hrvatski

Utjecaj mutacija U1406A, A1408G i C1409G u ribosomskom mjestu A na bakterijski rast i rezistenciju na aminoglikozidne antibiotike

Ribosomi su stanični organeli čija je funkcija u stanici prevođenje slijeda nukleotida u mRNA u slijed aminokiselina tj. protein. Za pravilno čitanje genetičkog koda zadužen je dekodirajući centar male ribosomske podjedinice u čemu glavnu ulogu ima 16S rRNA. Sintezu proteina kod prokariota otežavaju aminoglikozidi, oligosaharidni antibiotici koji se se vežu na A-mjesto 16S rRNA te uzrokuju pogrešno čitanje genetičkog koda i ugradnju pogrešnih aminokiselina u proteine, što dovodi do oštećenja i smrti bakterijskih stanica. Ovaj rad proveden je s ciljem da se istraži utjecaj mutacija evolucijski očuvanih baza na rast i rezistenciju bakterija na aminoglikozide. Mutacije U1406A, A1408G i C1409G su uvedene u fragment rrnB operona PCR-mutagenezom. Fragment je potom kloniran u plazmid pLK-35, kojim su transformirane stanice E. coli MC338 s delecijama u svih 7 operona za rRNA. Utjecaj mutacija na soj MC338 ispitan je praćenjem rasta i izračunom generacijskih vremena te određivanjem minimalne inhibitorne koncentracije kanamicina. Rezultati pokazuju da mutacije U1406A i A1408G dovode do rezistencije na kanamicin iz čega zaključujemo da su te baze važne za vezanje kanamicina na 16S rRNA. Iste mutacije ne utječu značajno na brzinu rasta bakterija. Mutacija C1409G se pokazala kao letalna, što znači da ona za razliku od mutacija U1406A i A1408G ima izniman utjecaj na ulogu dekodirajućeg centra ribosoma u translaciji. Dobiveni mutantni sojevi E. coli daju temelj za daljnja istraživanja metil-transferaza iz porodica Arm i Kam te za dizajn specifičnih inhibitora koji bi spriječili bakterijsku rezistenciju na aminoglikozidne antibiotike.

Ribosom; A mjesto; PCR mutageneza; MIK; generacijsko vrijeme

nije evidentirano