hrvatski

Utjecaj metil-transferaze Sgm na rast stanica i tocnost sinteze proteina u stanicama bakterije Escherichia coli DH5alpha

Mehanizam otpornosti na antibiotike modifikacijom ciljnog mjesta djelovanja posredovan 16S rRNA metil-transferazama iz porodica Arm i Kam uobičajen je kod sojeva bakterija koji su prirodni proizvođači antibiotika, a pronađen je i kod patogenih sojeva otpornih na aminoglikozidne antibiotike. Metil-transferaze porodice Arm metiliraju evolucijski visoko očuvano mjesto A ribosomske podjedinice 30S na nukleotidu G1405 te time „zaklanjaju“ vezno mjesto za aminoglikozidne antibiotike čineći bakteriju otpornom na njih. Cilj ovog rada je ispitati biološki učinak metil-transferaze Sgm u stanicama E. coli DH5alpha. Usporedbom generacijskih vremena stanica E. coli DH5alpha sa i bez rekombinantnog plazmida koji sadrži gen za metil-transferazu Sgm te provedbom testa konkurencije rasta stanica ispitano je usporava li prisutnost metil-transferaze Sgm rast stanica E. coli DH5alpha te opterećuje li enzim stanice kad se uzgajaju u zajedničkoj kulturi s istim stanicama bez metil-transferaze tijekom više ciklusa rasta. Kako bi se istražili mogući mehanizmi uzroka sporijeg rasta stanica s metil-transferazom Sgm proveden je beta-galaktozidazni test. Njime je ispitan utjecaj metil-transferaze Sgm na točnost dekodiranja tijekom translacije mRNA na ribosomu. Rezultati pokazuju da stanice E. coli DH5alpha koje eksprimiraju metil-transferazu Sgm rastu sporije od stanica koje ju ne eksprimiraju što upućuje da prisutnost metil-transferaze usporava rast bakterijske stanice. Također, u uvjetima nadmetanja za hranjive tvari i životni prostor stanice E. coli DH5alpha s metil-transferazom Sgm ne mogu konkurirati stanicama bez ovog enzima. Provedbom beta-galaktozidaznog testa pokazalo se da prisutnost metil-transferaze Sgm metilacijom ciljnog nukleotida u 16S rRNA uzrokuje učestalije pogreške prilikom dekodiranja na A-mjestu ribosoma tijekom elongacije što može biti uzrok uočenog usporenja rasta stanica. Dobiveni rezultati daju podlogu za daljnja istraživanja metil-transferaza iz porodice Arm kao faktoru otpornosti na aminoglikozidne antibiotike te njihovom utjecaju na biokemijske procese ključne za život bakterijske stanice čime se otvaraju mogućnosti razvoja novih tipova lijekova važnih u suzbijanju bakterijske otpornosti na aminoglikozidne antibiotike.

aminoglikozidni antibiotici; otpornost na antibiotike; metil-transferaza Sgm; tocnost dekodiranja; rast bakterija

nije evidentirano