hrvatski

Procjena djelotvornosti dvaju protokola za izolaciju DNA iz krvi i bukalne sluznice primjenom Qubit fluorometra i qPCR uređaja

UVOD: Učinkovita izolacija DNA iz različitih bioloških uzoraka osnova je uspješne forenzičke analize genetičkog materijala. Ionsko- izmjenjivačke smole i komercijalne silika kolonice najčešći su primjeri neafinitetnih i afinitetnih metoda koje se koriste za izolaciju DNA iz oskudnih uzoraka poput krvnih mrlja ili brisa bukalne sluznice. Izbor optimalne metode za izolaciju DNA izrazito je važan za uspješnost posljedičnih forenzičkih analiza te je u tu svrhu ispitivana učinkovitost Chelex® InstaGene™ i Qiagen® QIAamp Mini komercijalnih kompleta. CILJ: Odrediti djelotvornost ispitivanih metoda za izolaciju DNA iz brisa bukalne sluznice i krvne mrlje mjerenjem količine i kvalitete DNA na QUBIT fluorometru i uređaju qPCR. MATERIJAL I METODE: Upotrijebljeni su uzorci krvi i brisa usne sluznice. DNA je izolirana InstaGene reagensom i QIAamp Blood Mini kompletom. Koncentracija DNA izmjerena je QUBIT fuorometrom i qPCR uređajem, primjenom Qubit High Sensitivity DNA i QuantiFiler Human DNA Quantification seta. REZULTATI: Značajno veći prinos DNA materijala dobiven je iz briseva usne sluznice u odnosu na količinu DNA dobivenu iz mrlja krvi. U populaciji istovrsnih uzoraka nisu zabilježene značajne razlike u količini DNA koja je dobivena primjenom InstaGene smole ili QIAamp Mini kompleta. Najveći stupanj korelacije između QUBIT i qPCR mjerenja zabilježen je u uzorcima obrisaka usne sluznice, a podudarnost mjerenja opada sa smanjenim prinosom DNA materijala. ZAKLJUČAK: U odnosu na InstaGene reagens, QIAamp Blood Mini komplet jednako je dobar izbor za izolaciju DNA iz briseva usne sluznice, ali je manje prihvatljiv za izolaciju optimalnih količina DNA iz krvnih mrlja.

bris usne sluznice ; DNA ; krvna mrlja ; lančana reakcija polimerazom u stvarnom vremenu

nije evidentirano