Nalazite se na CroRIS probnoj okolini. Ovdje evidentirani podaci neće biti pohranjeni u Informacijskom sustavu znanosti RH. Ako je ovo greška, CroRIS produkcijskoj okolini moguće je pristupi putem poveznice www.croris.hr
izvor podataka: crosbi

Hormonska modulacija proliferacije i diferencijacije limfatičkih stanica u normalnom i patološkom rastu (CROSBI ID 329420)

Ocjenski rad | doktorska disertacija

Trobonjača, Zlatko Hormonska modulacija proliferacije i diferencijacije limfatičkih stanica u normalnom i patološkom rastu / Radošević-Stašić, Biserka (mentor); Rijeka, Medicinski fakultet u Rijeci, . 1998

Podaci o odgovornosti

Trobonjača, Zlatko

Radošević-Stašić, Biserka

hrvatski

Hormonska modulacija proliferacije i diferencijacije limfatičkih stanica u normalnom i patološkom rastu

U radu su prezentirani učinci somatostatinskog analoga SMS 201-995 (oktreotida) na procese proliferacije i diferencijacije normalnih i patoloških (malignih) limfatičkih stanica. Poznato je, naime, da je normalni rast limfatičkih stanica, tijekom sazrijevanja od progenitorskih do zrelih oblika, te nakon aktivacije zrelih stanica, okarakteriziran dobro reguliranim diferencijacijskim procesima, dok je maligni rast obilježen nekontroliranom proliferacijom i gubitkom mogućnosti diferencijacije. Osim izravnim međustaničnim kontaktima, ovi procesi su kontrolirani i različitim humoralnih čimbenicima, koji obilježavaju mikrookolišne uvjete u nekom tkivu. Među regulacijskim polipeptidima, značajnu ulogu mogao bi imati i somatostatin (SOM), koji se može sintetizirati u neuroendokrinim stanicama timusa, a ima i specifične receptore na limfatičnim i stromalnim stanicama timusa. Budući da se tijekom timusne diferencijacije, koja obuhvaća procese pozitivne i negativne selekcije stvara zreli T-limfocitni repertoar, tijekom čega se programiranom staničnom smrti odstranjuju stanice koje ne zadovolje kriterije selekcije, u ovom radu smo analizirali učinke SMS-a u modelima u kojima smo oponašali apoptotičke utjecaje na normalne razvojne oblike limfocita T. U tu svrhu timocite smo in vivo i in vitro stimulirali sa: 1) anti-CD3 protutijelima, koja dovode do apoptoze aktivacijom T staničnog receptora (TCR) i 2) deksametazonom (DEX), koji uzrokuje apoptozu genskom represijom. U vremenskoj dinamici (6h, 18h, 36h, 3dana, 5dana), određivali smo potom fenotipsku zastupljenost CD4+CD8+ (dvostruko pozitivnih, DP stanica) i usmjerenih, jednostruko pozitivnih (JP), CD4+CD8-, odnosno CD4-CD8+, te CD3+ stanica, kao i zastupljenost stanica sa fragmentiranom DNA. Rezultati su pokazali da in vivo primjena SMS-a blokira apoptotički utjecaj anti-CD3 protutijela, a potiče apoptozu uzrokovanu DEX-om. Promjene u intenzitetu apoptoze dokazane su utvrđivanjem fragmentacije DNA, elektroforezom na gelu, ali i kvantifikacijom broja stanica sa subdiploidnom količinom DNA na protočnom citometru, te smanjivanjem postotka DP stanica. SMS je u kombinaciji sa DEX-om povećao i postotak CD4-CD8+ T limfocita. Istovremeno smo analizom staničnog ciklusa utvrdili da je primjena SMS-a zajedno sa anti-CD3 smanjila postotak stanica u S fazi, u odnosu na izoliranu stimulaciju anti-CD3 protutijelima, dok je SMS u primjeni sa DEX-om izazvao nakupljanje stanica u S fazi. In vitro pokusi su pokazali da primjena SMS-a također usporava apoptozu kultiviranih timocita, izazvanu anti-CD3 protutijelima, ali da ne djeluje na apoptozu izazvanu DEX-om. U ovim pokusima primijetiti smo da SMS ometa i proces maturacije timocita nakon anti-CD3 stimulacije, djelujući na nishodnu regulaciju CD4 i CD8 biljega, kao i na ekspresiju TCR, većeg ili manjeg intenziteta. U nastojanju da utvrdimo mehanizme unutarstaničnog djelovanja SMS-a u dijelu pokusa pratili smo i učinak SMS-a na utok iona Ca2+ u limfocite periferne krvi. Preinkubacija sa SMS-om nakon stimulacije stanica sa PMA inhibirala je kalcijski odgovor izazvan sa anti-CD3 i anti-mišjim IgG, dok pretretman SMS-om prije stimulacije sa PMA nije imao učinka, ukazujući na mogućnost da SMS ne umanjuje samo unutarstaničnu koncentraciju Ca2+, već da blokira i neki mehanizam ovisan o protein kinazi C. Učinke SMS-a na rast i diferencijaciju malignih stanica proučavali smo in vivo primjenom hormona u A/J miševa, u kojima je maligni rast induciran na dva načina: 1) inokulacijom singenične, netretirane T-limfocitne linije YAC-1, te 2) inokulacijom YAC-1 linije, koja je bila dugoročno (tijekom dva mjeseca) inkubirana sa SMS-om. U prvoj vrsti pokusa utvrdili smo da dio životinja (oko 70%) pojačano ugiba nakon in vivo tretmana SMS-om, dok dio (oko 30%) živi značajno duže. U drugoj vrsti pokusa utvrdili smo da je SMS potencirao malignost YAC-1 stanica, jer je dugoročni pretretman ove stanične linije značajno skratio preživljavanja inokuliranih miševa u odnosu na miševe injicirane sa netretiranim YAC-1 stanicama. Fenotipska analiza ovih, SMS-om pretretiranih stanica pokazala je da one pojačano eksprimiraju CD2, CD4, CD44, CD54 biljege, kao i receptor za IL-2. Rezultati pokazuju da SOM značajno utječe na procese diferencijacije i proliferacije normalnih limfocita T u timusu, te malignih T-limfocitnih staničnih linija u in vivo i in vitro uvjetima. Budući da se on i normalno stvara i luči u timusu, očito je da bi procesi negativne i pozitivne selekcije u timusu mogli biti pod hormonskom kontrolom, te da bi poremećaj u ovom djelovanju mogao rezultirati pojavom autoreaktivnih klonova stanica i nedostatnim imunološkim odgovorom. Osim toga, rasvjetljavanje mehanizma njegovog djelovanja u apoptozi, moglo bi imati veliki značaj pri mogućem tretmanu patološke proliferacije stanica.

SMS 201-995; timus; kortizol; anti-CD3; anutarstanični kalcij

nije evidentirano

engleski

Hormonal modulation of the proliferation and differentiation of lymphytic cells in normal and pathological growth

nije evidentirano

SMS 201-995; thymus; dexamethasone; apoptosis; differentiation and proliferation of T cells; Yac-1 in vivo and in vitro; intracellular Ca concentration

nije evidentirano

Podaci o izdanju

175

18.12.1998.

obranjeno

Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj

Medicinski fakultet u Rijeci

Rijeka

Povezanost rada

nije evidentirano