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N-glycoprotéines de tissus de Mammillaria gracillis en culture in vitro

De tr&egrave ; s nombreuses protéines fonctionnelles chez les eucaryotes sont glycosilées. La recherche de groupements glycosidiques &agrave ; l’ extrémité N-terminale (N-glycan) des protéines végétales s’ est intensifié en raison du rôle physiologique attribué &agrave ; ces structures (conformation, stabilité des protéines et activité biologique). Cependant, peu d’ informations sont disponibles sur la nature des glycoprotéines en rapport avec la différentiation et la transformation des cellules. En culture in vitro, le cactus Mammilliria gracillis Pfeiff. produit spontanément un cal habitué dont la croissance est indépendante des facteurs hormonaux. Ce cal est capable de régénérer des pousses normales ou hyperhydriques. Afin de comparer ces lignées habituées avec des lignées tumorales, les cellules de cactus ont été transformées avec Agrobacterium tumefaciens, souche sauvage B6S3 (tumeur TW). Cette tumeur se développe rapidement et ne présente aucune potentialité morphogénétique. Nous avons étudié les modifications des N-glycosylation dans les lignées habituées, les pousses régénérées normales, les pousses hyperhydriques et les lignées transformées ; puis recherché celles qui pouvaient &ecirc ; tre spécifiques des processus de développement. Les protéines ont été séparées par électrophor&egrave ; se 1-D et 2-D sur gel polyacrylamide, transférées sur des membranes de nitrocellulose et traitées par des lectines marquées &agrave ; la digoxigenine et &agrave ; la biotine. La composition des N-glycanes a été analysée par spectrométrie de masse MALDI-TOF et met en évidence que la majorité des oligosaccharides détectés sont d’ un type complexe. La tumeur TW présente une plus grande diversité en N-glycanes que les tissus non transformés. Les résultats obtenus indiquent que la complexité des structures des N-glycanes augmente avec la perte de l’ organisation tissulaire. Le profil de N-glycosylation des protéines cellulaires solubles peut &ecirc ; tre corrélé spécifiquement avec le niveau de morphogen&egrave ; se de la lignée cellulaire de cactus concerné.Le cactus Mammillaria gracillis Pfeiff, cultivé in vitro sur un milieu de Murashige et Skoog sans hormones, produit spontanément une tr&egrave ; s abondante masse de cal. Ce cal est autonome aux hormones (habitué) et il exprime une fort potentialité de régénération. Dans la m&ecirc ; me culture, des pousses morphologiquement normales (non altérés) et les pousses hypehydriques sont régénérées. Afin de comparer le cal habituées avec le cal tumorale, les cellules de cactus ont été transformées avec Agrobacterium tumefaciens, le souche sauvage B6S3 (tumeur TW). Cette tumeur se développe rapidement et ne présente aucune potentialité morphogénétique.

N-glycanes. morphogenese; organisation tissulaire; profils proteiques

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