hrvatski

Kloniranje i ekspresija gena za seril-tRNA-sintetazu iz kukuruza Zea mays

U skolopu istraživanja odnosa strukture i funkcije citoplazmatskih i organelnih seril-tRNA- sintetaza (SerRS) karakterizirana je cDNA (SerZMm) dobivena iz biblioteke cDNA kukuruza. Ova cDNA kodira protein sa značajnim stupnjem homologije s prokariotskim enzimima SerRS. Analiza prvih 50 aminokiselina proteina SerZMm ukazuje da ove aminokiseline najvjerojatnije predstavljaju signalni slijed za upućivanje u mitohondrij. Da bismo utvrdili identitet kloniranog gena , eksprimirali smo regiju, koja na temelju usoredbe sa SerRS iz ostalih organizama, odgovara zrelom proteinu. Mutagenezom in vitro uvedeni su početni kodon i odgovarajuća restrikcijska mjesta koja omogućuju jednostavno kloniranje u ekspresijski vektor pET11d. Rekombinantni plazmid pET11SerZMm komplementirao je temperaturno-osjetljivu mutaciju u genu za SerRS eubakterije Escherichia coli. Zreli protein SerZMm pojačano eksprimiran u E. coli učinkovito je aminoacilirao bakterijsku tRNASer in vitro, a kvaščeva tRNA bila je loš supstrat. Ovi podaci ukazuju na strukturnu i funkcionalnu sličnost proteina SerZMm i eubakterijskih seril-tRNA-sintetaza, te identificiraju SerZMm kao prvu kloniranu mitohondrijsku SerRS u biljaka.

cDNA; ekspresija; komplementacija; seril-tRNA-sintetaza; Zea mays

nije evidentirano