hrvatski

Neposredna molekularna evolucija gena u bakterije Escherichia coli rekombinacijom u uvjetima in vivo

Neposredna molekularna evolucija gena je nova metoda za dobivanje enzima poboljšanih svojstava. Zasniva se na uvođenju genetičke raznolikosti mutacijama i rekombinacijom, te selekciji proteina sa željenim svojstvima. U ovom radu razvila sam novi sustav za molekularnu evoluciju gena u uvjetima in vivo, koji omogućava rekombinaciju između gena koji ne posjeduju savršenu homologiju na razini DNA (tzv. homeolognu rekombinaciju). Konstruiran je plazmidni vektor pBG, koji sadržava odgovarajuće genetičke biljege za jednostavno praćenje procesa rekombinacije. Kao domaćin za proces rekombinacije upotrijebljena je bakterija Escherichia coli AB1157 (recAo98) u kojoj je inaktiviran sustav za popravak krivo sparenih parova baza (Δ mutS). Sustav je ispitan upotrebom niza od četiri gena OXA čiji su produkti enzimi β -laktamaze. Između odabrana četiri gena homologija je, na razini DNA, iznosila: 100, 95, 78 i 53%. Dobiveni su rekombinanti između gena OXA-11 i gena OXA-7 (95% homologije), dok rekombinacija između gena s homologijom 78 i 53% nije otkrivena. U izogenom soju s aktivnim proteinom MutS, rekombinacija nije primjećena niti u jednoj kombinaciji gena. To upućuje na ključnu ulogu proteina MutS u sprječavanju homeologne rekombinacije u ovom sustavu.

Proces rekombinacije; Escherichia coli; sustav za popravak krivo sparenih baza; homologni geni; homeologni geni

nije evidentirano