hrvatski

Pročišćavanje i određivanje uvjeta kristalizacije seril-tRNA sintetaze iz Saccharomyces cerevisiae

Seril-tRNA sintetaza je enzim ključan za ispravnu biosintezu proteina čiji je konstituent aminokiselina serin. Strukturno i funkcionalno, seril-tRNA sintetaza iz citoplazme kvasca Saccharomyces cerevisiae, koji je učestalo korišten kao model eukariotske stanice, nalikuje na do sada dobro istražene seril-tRNA sintetaze prokariota (E. coli, T. thermophilus). U ovom radu opisana je nadekspresija citoplazmatske seril-tRNA sintetaze u stanicama Saccharomyces cerevisiae, pročišćavanje dobivenoga enzima kromatografijom u FPLC sustavu na kolonama MonoQ i MonoS te određivanje uvjeta kristalizacije pročišćenoga enzima metodom difuzije para sjedeće i viseće kapi. Određivanje uvjeta kristalizacije seril-tRNA sintetaze temelji se na korištenju otopina proteina različite koncentracije uz različite uvjete, obzirom na tip i koncentraciju aditiva i precipitanata koje sadrži te obzirom na pH. U mnogim je kapima dobiven amorfni precipitat, međutim neoliko kapi sadržavalo je monokristale. Najbolji kristalići dobiveni su iz zasićene otopine amonijeva sulfata uz aditive koji su po prirodi anorganske soli i hlapljiva organska otapala male molekulske mase.

Saccharomyces cerevisiae; seril-tRNA sintetaza; pročišćavanje makromolekula; kristalizacija makromolekula; kristalizacijske tehnike

nije evidentirano