hrvatski

Proteinska slika i N-glikozilacija proteina tijekom diferencijacije stanica u kulturi tkiva kaktusa Mammillaria gracillis Pfeiff.

U ekstraktima tkiva kaktusa Mammillaria gracillis Pfeiff. otkriveno je nekoliko razvojno specifičnih staničnih proteina. Nakon prijenosa proteina na nitroceluloznu membranu i obrade lektinom Con A, pojedini N-glikoproteini bili su jako izraženi u svim tkiva osim u izdanku. Glikoproteini tkiva kaktusa detaljnije su istraženi s obzirom na sastav šećernih ostataka. Analize su obuhvatile postupke: razdvajanje topivih staničnih proteina iz različitih tkiva kaktusa (izdanak, kalus, hiperhidrirani regenerant i tumor) 1-D i 2-D elektroforezom, prijenos proteina na nitroceluloznu membranu i otkrivanje razvojno-specifičnih glikoproteina različitim lektinima, enzimsko odcjepljivanje N-vezanih glikana glikoproteina od 42 kDa i analizu HPAEC-PAD sastava oligosaharida te analizu strukture N-glikana masenom spektrometrijom MALDI i ESI. Cilj istraživanja bio je dobiti informacije o promjenama u ekspresiji gena koje dovode do prijelaza s organiziranog na neorganizirani način rasta u kulturi tkiva kaktusa otkrivanjem razlika u N-glikozilaciji razvojno-specifičnih proteina u navedenim tkivima. Svi primijenjeni lektini pozitivno su reagirali sa staničnim glikoproteinima iz tkiva kaktusa. Najveći broj glikoproteinskih vrpci prikazan je lektinom GNA, što navodi na zaključak da je većina N-glikoziliranih proteina visoko-manoznog ili hibridnog tipa. Najveći broj glikoproteina otkriven je u tumoru, dok je ekstrakt biljke imao najmanji broj glikoproteina. Analiza glikoproteina razdvojenih 2-D elektroforezom, koji su otkriveni lektinom Con A, pokazala je najveći broj glikoproteinskih mrlja u ekstraktu tumora. Masena spektrometrija MALDI-TOF otkrila je najviše šećernih struktura u tumoru nakon deglikozilacije peptidnom N-glikozidazom A. Oligosaharidi su većinom pripadali N-glikanima složenog tipa. Masenom spektrometrijom MALDI-TOF šećernih ostataka glikoproteina od 42 kDa iz različitih tkiva kaktusa, otkrila je paucimanozidne N-glikane u oligosaharidima izdanka i kalusa. Hiperhidrirani regenerant i tumor pokazali su veću raznolikost pripisanih struktura među kojima su bili i duži N-glikani složenog i hibridnog tipa s jednom ili dvije antene. Masena spektrometrija ESI-TOF otkrila je strukture N-glikana visoko-manoznog tipa u šećernim ostacima glikoproteina od 42 kDa iz neorganiziranih tkiva, kalusa i tumora. Izuzetno heterogenu smjesu oligosaharida imao je hiperhidrirani regenerant u kojem je većina šećera pripadala složenim N-glikanima. Pozitivna reakcija s proteinima kaktusa dobivena lektinima SNA i MAA ukazala je na moguću prisutnost sijalinske kiseline u tim glikoproteinima. Analizom HPAEC-PAD utvrđen je jedan tip sijalinske kiseline, N-acetilneuraminska kiselina, u tkivu kalusa i tumora, dok prisutnost drugog tipa, N-glikolilneuraminske kiseline, nije dokazana. Masenom spektrometrijom ESI-TOF otkrivene su tri oligosaharidne strukture koje bi mogle sadržavati sijalinsku kiselinu. Iz dobivenih rezultata vidljivo je da se različita morfološka stanja tkiva kaktusa odražavaju u N-glikozilacijskom uzorku staničnih proteina.

Cacatae; diferencijacija; 2-D elektorforeza; Mammillaria gracillis; masena spektrometrija; N-glikozilirani proteini; sijalinska kiselina

nije evidentirano