hrvatski

Primjena fluorescentne spektroskopije u istraživanju međudjelovanja alkohola i lipoproteina velike gustoće

Veliki interes za ispitivanje strukture, funkcije i dinamike lipoproteina temelji se na činjenici da ove čestice sudjeluju u pojavi ateroskleroze i ostalih koronarnih bolesti. Alkohol pojačava protektorsko djelovanje HDLa. Naš je cilj primjenom fluorescencijske spektroskopije ispitati utjecaj alkohola na strukturu HDL2 i HDL3 čestica posebno na interakciju između proteina i lipida. Prirodni fluorofor iz apo A - I, triptofan, koristan je za ispitivanje ponašanja apoproteina u lipoproteinima, a za ispitivanje lipidnog dijela čestice upotrijebljena je sintetizirana proba PRODAN. Ispitivano je ponašanje PRODANa u ovisnosti o koncentraciji etanola da bi dokazali da etanol ne izaziva strukturne promjene fluorescentne probe tijekom vremena života pobuđenog stanja. Matematički su modelirani svi spektri i određeni fluorescencijski parametri PRODANa u ovisnosti o koncentraciji etanola u otopini. Te rezultate smo koristili za analizu složenih fluorescencijskih spektara PRODANa u adekvatnim otopinama lipoproteina. Tako provedena matematička analiza omogućila je rastavljanje mjerenog spektra PRODANa ugrađenog u lipidni monosloj i spektra PRODANa slobodnog u fosfatnom puferu. Rastavljenim spektrima prilagođavali smo teorijsku krivulju koja je predstavljala zbroj dvije Gaussove funkcije. Mjerili smo intenzitete i Stokeov pomak tih spektara. Dodatak alkohola smanjuje intenzitet molekulske probe ugrađene u lipoproteine i pomiče spektar prema crvenom. Mjerili smo i anizotropiju. Dodatak alkohola smanjuje vrijednost anizotropije. Promjene fluorescencijskih parametara jasno upućuju da etanol povećava polarnost medija oko probe, ali istodobno oslobađa prostor za veću gibljivost probe, što se može objasniti da uzrokuje pomicanje fosfolipidnih glava tako da dozvoli ulaz vodenih molekula u sloj pri površini. Snimljeni spektri analizirani su pomoću metoda: generalizirana polarizacija dvije valne duljine ( 2wGP ) i tri valne duljine ( 3wGP ). Usporedbom rezultata tih dviju metoda i rezultata iz matematičkog modeliranja spektara zaključili smo da metoda generalizirane polarizacije ne uklanja potpuno doprinos PRODANa iz otapala pa opis međudjelovanja etanola i lipoproteina nije točan. Točnije promatranje možemo temeljiti na rezultatima simuliranih emisijskih spektara PRODANa. Mjerenja prijenosa energije s prirodne probe triptofana u apo A – I na membransku probu PRODAN, u ovisnosti o koncentraciji etanola, jasno ukazuje na utjecaj etanola na interakciju između lipida i proteina u obje lipoproteinske čestice. Dodatak etanola usporuje prijenos energije, očito zato jer etanol ugradnjom u lipidni monosloj slabi interakciju između lipida i proteina. Podrazredi HDL2 i HDL3 jednako se ponašaju u svim razmatranjima.

fluorescencija; lipoproteini velike gustoće; etanol; PRODAN

nije evidentirano