hrvatski

Utjecaj promotora na ekspresiju gena za glikoprotein D pseudorabies virusa pri imunizaciji plazmidnim i adenovirusnim vektorima

Konstruirani su plazmidni vektori u kojima se nalazi gen za glikoprotein D (gD) pseudorabies virusa (PRV) pod kontrolom tri promotora: promotora prvog ranog gena humanog citomegalovirusa (CMV), promotora dugog ponavljajućeg slijeda virusa Rousovog sarkoma (RSV) i mišićno specifičnog promotora humanog gena za desmin (DES). Plazmid pMLPgD, u kojem se gen za gD nalazi pod kontrolom glavnog kasnog promotora adenovirusa tip 2 (MLP), konstruiran je ranije. Pročišćenim plazmidnim vektorima pMLPgD, pCMVgD, pRSVgD i pDESgD vakcinirani su miševi, intramuskularnim putem, s tri različite doze, jednom ili dva puta. Enzim-imunološkim testom u serumima vakciniranih miševa, pokazana je prisutnost gD specifičnih protutijela u približno 80% miševa, bez velikih razlika u količini protutijela potaknutih različitim plazmidnim DNA. Kod miševa koji su primili dvije doze gD specifična protutijela su prisutna duže nego kod miševa koji su primili samo jednu dozu. Serumi vakciniranih miševa nemaju neutralizacijsku sposobnost in vitro, a životinje nisu zaštićene od provokacije smrtnom dozom PRV. Konstruirani plazmidni vektori korišteni su za konstrukciju adenovirusa defektnih u replikaciji: AdCMVgD, AdRSVgD i AdDESgD. Metodom precipitacije monokolonskim protutijelima protiv gD, radioaktivno obilježenih proteina iz kulture stanica, pokazana je sposobnog konstruiranih adenovirusa (kao i ranije konstruiranog AdMLPgD) da u staničnoj liniji 293 koja podržava njihovu replikaciju, usmjeravaju sintezu velikih količina gD, bez znatnih razlika u količini gD u ovisnosti o umetnutom promotoru. U staničnim linijama koje ne podržavaju replikaciju adenovirusa, primijećene su velike razlike u jačini promotora. Pokazano je da gotovo u svim istraženim kulturama stanica promotori CMV i DES potiču snažniju ekspresiju gena za gD, nego što to čine promotori MLP i RSV. Pretpostavljena je uključenost E1A pojačivača u gubitku mišićne specifičnosti ekspresije promotora DES. Vakcinacija miševa rekombinantnim AdMLPgD, AdCMVgD, AdRSVgD i AdDESgD učinjena je jednokratno, intramuskularnim putem. Dobivena protutijela u serumu imaju sposobnost neutralizacije in vitro, a vakcinirane životinje su zaštićene od provokacije smrtnom dozom PRV. Dobiveni rezultati in vitro u skladu su sa određenom zaštitnom vakcinalnom dozom, koja je za AdCMVgD i AdDESgD znatno smanjena u odnosu na onu za AdMLPgD i AdRSVgD.

Vakcinacija; Plazmidna DNA; Rekombinantni adenovirus; Pseudorabies virus

nije evidentirano