hrvatski

Ispitivanje restrikcijskog polimorfizma hepatocitnog činitelja rasta

HGF je citokin s višeznačnim djelovanjem na mnogobrojne stanice i glavni je činitelj regeneracije jetre. Razine HGF povišene su u procesu regeneracije i raznih bolesti jetre. Alkoholna bolest jetre karakterizirana je upalnim podražajem Ito stanica koje su glavno mjesto sinteze HGF. Pad koncentracije HGF u serumu pozitivan je prognostički znak tijeka bolesti kojeg istovremeno prati proces fibroze sa smanjenom sintezom HGF. Pretpostavka o postojanju svojevrsnog polimorfizma gena postavljena je na osnovu različitih oblika gena čiji proteinski produkti imaju promijenjenu biološku aktivnost. U svrhu unapređenja dijagnostike bolesti jetre od bitne je važnosti sustavno ispitati polimorfizam/mutacije gena hHGF u zdravih i ispitanika s alkoholnom bolešću jetre. Četvrti ekson gena hHGF kodira dio domene neophodne za vezanje na receptor i njegov je polimorfizam ispitivan u ovom radu metodom PCR-RFLP. Određivanjem biokemijskih pokazatelja bolesti jetre razlučene su dvije skupine ispitanika, zdravi dobrovoljci (N=40) i bolesnici (N=30), koje su predmijevane i prema kliničkim i anamnestičkim podacima. Koncentracija HGF određena u serumu vrijedan je razlikovni biljeg prisutne ili odsutne bolesti jetre. Iz pune krvi ispitanika izolirana je DNA pri čemu pokazatelji kao što su koncentracija, kakvoća i indeks čistoće govore o prikladnosti metode u svrhu daljnjih postupaka na genetskoj razini. Izolirana DNA koristila se za umnažanje ulomka od interesa u optimiranoj reakciji PCR pri čemu su fizikalni i kemijski uvjeti ranije određeni prema rezultatima optimiranja specifične PCR. Potpunim restrikcijskim cijepanjem alikvota produkta PCR s tri odabrana RE ispitano je moguće postojanje mutacija na početnom (Alu I), srednjem (Dde I) i krajnjem (Mva I) dijelu PCR produkta. Budući se elektroforezom na poliakrilamidnom gelu bojanim srebrom postigla visoka osjetljivost i moć razdvajanja korištena je u daljnjim postupcima analize rezultata. Pri tome su rezultati analize pokazali da su vrpce produkata PCR (N=70) i njihovih restrikcijskih ulomaka očekivane veličine gledano prema molekularnom biljegu kao i prema poznatoj veličini i nukleotidnom slijedu. Dobiveni rezultati upozoravaju da nije nađena promjena nukleotidnog slijeda produkta PCR i restrikcijskih ulomaka na razini ispitane skupine bez obzira na bolest jetre. Rezultatima ovog rada postavljeni su optimalni uvjeti za sustavno ispitivanje mutacije, polimorfizma eksona IV gena hHGF metodom PCR-RFLP.

hepatocitni činitelj rasta; alkoholna bolest jetre; PCR-RFLP

nije evidentirano