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Aislamiento e identificacion de analogos de genes de resistencia en habas (Vicia faba L.) y garbanzos (Cicer arietinum L.): Aplicacion en mejora

El presente estudio se ha basado en la amplificación y clonación de secuencias homólogas a genes de resistencia conocidos (genes R) en 5 líneas de habas y 2 de garbanzo. Para ello, se han utilizado como cebadores oligonucleótidos degenerados dise&ntilde ; ; ados a partir de las regiones conservadas (NBS-LRR: nucleotide binding site-leucine rich repeat) de genes de resistencia (R) conocidos. De las seis combinaciones de cebadores empleadas, dos de ellas amplificaron fragmentos del tama&ntilde ; ; o esperado (510-580pb) que fueron seleccionados para clonación. La comparación a través del banco de datos (BLAST) de los 149 clones secuenciados ha permitido identificar 69 RGAs, cuyas secuencias de aminoácidos presentaban gran homología con varios genes de resistencia: I2 y Mi1-1 de tomate, TMV y RPP13 de Arabidopsis thaliana, Gro1-4 de patata, y muchas secuencias (RGAs) de lenteja, guisante, garbanzo etc., recientemente aisladas con métodos similares. El alineamiento múltiple de las secuencias obtenidas y de algunos genes R reveló la presencia de los motivos internos conservados característicos de los genes de resistencia pertenecientes a la clase NBS-LRR, kinasa 2 (LXXLDDVX) y kinasa 3a (GSRI/VIITTR). La presencia de estos motivos, independientes de las secuencias de los cebadores, confirma que estos clones codifican posibles genes de resistencia que contienen secuencias NBS. El análisis filogenético agrupó los clones en 10 clases considerando el 70 % de similaridad como límite y reveló que 23 de las 69 secuencias pertenecía al grupo TIR siendo el resto del tipo non-TIR. El análisis de polimorfismo y diversidad realizado con 12 clones representativos de cada clase, mostró las regiones más conservadas y las más variables dentro de las secuencias. Estas regiones variables nos permitirán dise&ntilde ; ; ar cebadores específicos que pudieran ser útiles para el mapeo. Nuestro trabajo futuro se centrará en identificar posibles asociaciones entre dichos marcadores y los genes o QTLs de resistencia a Orobanche crenata, o los hongos patógenos Ascochyta fabae, Uromyces y Fusarium, ya identificados en poblaciones RILs de habas y garbanzos que segregan para dichos caracteres. El mapeo de los RGAs obtenidos aumentaría la eficiencia de selección para resistencia en los programas de mejora de ambos cultivos.

analogos de genes de resistencia; Vicia faba L.; Cicer arietinum L:; NBS-LRR

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