hrvatski

UBLAŽAVANJE REAKCIJE PRESATKA PREMA PRIMAOCU FARMAKOLOŠKOM INAKTIVACIJOM LIMFOCITA T U MIŠJOJ KOŠTANOJ SRŽI

Cilj: Presađivanje alogeniene koštane srži uključuje reakciju primaoca prema presatku, reakciju presatka prema primaocu, reakciju presatka protiv leukemije, te prihvaćanje presatka i imunološki oporavak primaoca. Klinički i biološki učinci tih reakcija ovise o staničnom sastavu presatka. Cilj ovoga istraživanja je ublažavanje reakcije presatka prema primaocu farmakološkom predobradom presatka ciklosporinom i hidrokortizonom. Metode: Mišje stanice predobrađene ciklosporinom i hidrokortizonom (1 sat na 37°C) testirane su in vitro kako bi se utvrdilo djelovanje lijekova na stanice mišje koštane srži i limfnih čvorova. Proliferacijski test limfocita T koštane srži i limfnih čvorova učinjen je s pomoću mitogenika limfocita T Con A trodnevnim kultiviranjem suspenzija. Analiza ekspresije biljega limfocita T CD4 i CD8 s pomoću izravno obilježenih monoklonskih protutijela i analiza staničnog ciklusa stanica s pomoću propidijeva ijodida učinjena je protočnocitometrijski na stanicama limfnih čvorova. Ekspresije gena za citokine IL-1, IL-2, IL-4. IL-6, TNF-a, IFN-g, GM-CSF i TGF-b analizirana je obrnutim prepisivanjem glasničke RNA predobrađenih stanica koštane srži i polimeraznom lančanom reakcijom komplementarne DNA nakon 32 sata kultiviranja. Klonogena sposobnost obrađenih stanica koštane srži potvrđena je brojenjem hematopoetskih kolonija na polukrutom mediju nakon 10 dana kultiviranja. Učinci in vitro potom su testirani in vivo presađivanjem predhodno obrađene alogeniene koštane srži ozračenim primaocima i praćenjem razvoja reakcije presatka prema primaocu u genetičkoj kombinaciji miševa primalaca CBA (H-2k) i davalaca C57Bl/6 (H-2b). Rezultati: Ciklosporin i hidrokortizon koče proliferaciju limfocita T koštane srži i limfnih čvorova. Za kočenje proliferacija stanica koštane srži potrebna je viša ukupna doza lijekova. Pri kočenju proliferacije stanica limfnih čvorova lijekovi su djelotvorniji pri nižim dozama i imaju izraženiji aditivni učinak. U kulturi stanica limfnih čvorova podraženih mitogenikom, predhodno obrađenih ciklosporinom ili hidrokortizonom ili s oba lijeka, ciklosporin inhibira diferencijaciju limfocita CD8 i dvostrukopozitivnih stanica, te sprječava prijelaz stanica iz faze G0/G1 u faze S i G2/M staničnog ciklusa. Hidrokortizon smanjuje udio limfoblasta u suspenzijama stanica s mitogenikom, i s ciklosporinom djeluje aditivno inhibicijski na prijelaz stanica limfnih čvorova u faze sinteze i diobe. Obrada stanica koštana srži lijekovima inhibira ekspresiju gena za IL-1, IL-2 i, slabije, gena za TGF-b, a blago potiče ekspresiju gena za GM-CSF. Klonogena sposobnost presadaka košatne srži ne smanjuje se nakon obrade, a predobrada ciklosporinom povećava broj eritroidnih kolonija i ukupan broj kolonija koštane srži. Predobrada stanica koštane srži ciklosporinom i hidrokortizonom vjerodostojno ublažava akutnu reakciju presatka prema primaocu i vjerodostojno povisuje preživljenje u rasponu doza ciklosporina 10-100 mg i hidrokortozona 100-1000 mg/20x106 stanica/mL i pri tome lijekovi djeluju aditivno. Više primijenjene doze su toksične, a niže primijenjene doze nisu dovoljno djelotvorne. Zaključak: Ex vivo predobrada stanica presatka ciklosporinom i hidrokortizonom ublažava akutnu reakciju presatka prema primaocu i vjerodostojno poboljšava preživljenje primalaca obrađene alogenične koštane srži. Lijekovi svoj učinak ostvaruju kočenjem aktivacije, diferencijacije i proliferacije potaknutih pomoćničkih limfocita T (CD4+) i citotoksičnih limfocita T (CD8+), bez da oštećuju matične stanice; i pri tome djeluju aditivno.

GVHR; transplatacija; ciklosporin; hidrokortizon

nije evidentirano