hrvatski

Kultura tkiva ljudske kože

Uzorci ljudske kože veličine 1, 0-1, 5 cm2 uzeti prilikom rutinskih kirurških zahvata s privolom bolesnika upotrijebljeni su za postavljanje organotipičnih kultura. Epidermalni se sloj odvajao od dermisa enzimatskim djelovanjem enzima dispaze (12-18 sati u puferiranoj fiziološkoj otopini, 25 mg/mL). Od epidermisa i dermisa priređene su stanične suspenzije keratinocita i fibroblasta djelovanjem enzima tripsina (0, 125 posto u EDTA). Keratinociti su zatim inkubirani u selektivnom mediju za keratinocite (KSFM, Life Technologies), a fibroblasti u Dulbeccovom mediju (DMEM) s dodatkom fetalnog telećeg seruma. U fazi konfluencije keratinociti su tripsinizacijom odvojeni od dna kultivacijskih posuda i zasijani na sloj fibroblasta tako da se dobije dvoslojna kultura. Ona se uzgaja u posebno konstruiranim plastičnim Petrijevim posudicama koje u središnjem dijelu imaju uzvišenje tako da je sloj fibroblasta uronjen u kultivacijski medij (DMEM s dodatkom poticajnih činitelja) a sloj keratinocita je izvan medija. Dobivene organotipične kulture imaju višeslojni epitel koji na površini orožnjava i potporni ekvivalent dermisa s fibroblastima. U stanicama epitelnog sloja dokazana je nazočnost keratinskih zrnaca imnohistokemijskim bojenjem.

koža ; tkivna kultura ; keratinociti

nije evidentirano