hrvatski

Utjecaj zamrzavanja i odmrzavanja na građu i pokretljivost spermija čovjeka

Cilj rada bio je odrediti optimalne uvjete zamrzavanja za ljudske spermije usporedbom relativne krioprotektivne djelotvornosti dvaju medija za zamrzavanje: TEST-yolka i HSPM-a, i triju metoda zamrzavanja spermija: 1) naglim zamrzavanjem u tekućem dušiku, 2) brzim programiranim zamrzavanjem i 3) sporim programiranim zamrzavanjem. Određivana je pokretljivost, građa, cjelovitost stanične i akrosomske membrane spermija na 109 nativnih uzoraka ejakulata, te na uzorcima nakon zamrzavanja, odmrzavanja i ispiranja spermija. Nakon određivanja najučinkovitijeg medija i tehnike zamrzavanja cilj je bio analizirati utjecaj pentoksifilina, dbcAMP-a i adenozina dodavanih spermijima prije zamrzavanja ili nakon odmrzavanja na: pokretljivost, građu, cjelovitost stanične membrane i stanje akrosoma. Cilj rada bio je i procijeniti da li proces zamrzavanja i odmrzavanja različito djeluje na staničnu membranu glave i repa spermija, kao i na nastajanje novih nepravilnosti u građi različitih dijelova spermija. Ljudski spermiji zamrznuti tehnikom sporog programiranog zamrzavanja su nakon odmrzavanja imali značajno više pokretnih spermija (P<0, 001), spermija s cjelovitom staničnom membranom (P<0, 05) i normalnom građom (P<0, 001) u odnosu na brzo programirano i naglo zamrzavanje te značajno više spermija s cjelovitom membranom akrosoma (P<0, 001) u odnosu na naglo zamrzavanje. Spermiji zamrznuti u TEST-yolk mediju su nakon odmrzavanja imali značajno više pokretnih spermija (P<0, 05), spermija s cjelovitom staničnom membranom glave (primjenom sporog i brzog programiranog zamrzavanja) (P<0, 05), cjelovitom staničnom membranom repa (primjenom naglog i brzog programiranog zamrzavanja) (P<0, 05) i normalnom građom (primjenom brzog programiranog zamrzavanja) (P<0, 05) u odnosu na HSPM medij. U drugom dijelu istraživanja koje je provedeno na 102 uzorka ejakulata određen je TEST-yolk kao medij i sporo programirano zamrzavanje kao postupak zamrzavanja za istraživanje utjecaja 3 mmol/l pentoksifilina, 3 mmol/l dbcAMP-a i 2, 5 mmol/l adenozina na pokretljivost, građu, cjelovitost stanične membrane i stanje akrosoma spermija. Dodavanje pentoksifilina, adenozina i dbcAMP-a svježim uzorcima ejakulata tijekom razdoblja inkubacije prije zamrzavanja je nakon odmrzavanja utjecalo na značajno smanjenje pokretljivosti spermija (P<0, 001), cjelovitosti stanične (P<0, 001) i akrosomske membrane (P<0, 001), kao i na značajno veću (P<0, 001) razinu akrosomske reakcije u odnosu na kontrolnu skupinu. Dodavanje pentoksifilina, adenozina i dbcAMP-a mediju za zamrzavanje neposredno prije zamrzavanja je nakon odmrzavanja utjecalo na značajno smanjenje pokretljivosti spermija (P<0, 05), cjelovitosti membrane akrosoma (P<0, 05), cjelovitosti stanične membrane repa kada je dodavan dbcAMP (P=0, 02) i broja spermija s normalnom građom kada su dodavani adenozin i dbcAMP (P<0, 05), kao i značajno povećanje razine akrosomske reakcije (P=0, 001) kada je dodavan pentoksifilin u odnosu na kontrolnu skupinu. Dodavanje pentoksifilina, adenozina i dbcAMP-a odmrznutim uzorcima utjecalo je na značajno povećanje pokretljivosti spermija (P<0, 001), cjelovitosti stanične membrane glave (P<0, 05), cjelovitosti stanične membrane repa (P<0, 001) kada je dodavan pentoksifilin i razine akrosomske reakcije (P<0, 001), kao i na značajno smanjenje spermija s cjelovitom membranom akrosoma (P<0, 05) u odnosu na kontrolnu skupinu. Kombinirani HOS/eozin-nigrozinski test određivan prije zamrzavanja i nakon odmrzavanja je pokazao da je došlo do značajnog smanjenja (P<0, 001) udjela spermija s cjelovitom staničnom membranom glave i repa, kao i do značajnog povećanja (P<0, 001) udjela spermija s oštećenim staničnim membranama glave i repa, spermija s oštećenom membranom glave, ali s cjelovitom membranom repa te spermija s oštećenom membranom repa, ali s cjelovitom membranom glave. Prije zamrzavanja uočena je značajna korelacija između pokretljivosti i HOS testa (rho=0, 392 ; P=0, 004) te pokretljivosti i eozin-nigrozinskog testa (rho=0, 489 ; P<0, 001). Također, i nakon odmrzavanja pokretljivost je značajno korelirala s HOS (rho=0, 693 ; P<0, 001) i eozin-nigrozinskim testom (rho=0, 676 ; P<0, 001). Rezultati utvrđivanja nepravilnosti u građi različitih dijelova spermija prije i nakon postupaka zamrzavanja/odmrzavanja ukazali su na značajno povećanje (P<0, 001) nepravilnosti u područjima glave, vrata i srednjeg dijela te repa spermija, kao i značajno smanjenje (P<0, 001) spermija s ostatnim tjelešcima. Indeks teratozoospermije se nakon procesa zamrzavanja i odmrzavanja značajno povećao (P<0, 001).

Spermiji čovjeka; Zamrzavanje; Građa spermija; Pokretljivost spermija

nije evidentirano