hrvatski

Istraživanje učinka unosa gena p53 i p21WAF1/CIP1 u kombinaciji sa cisplatinom i metotreksanom na rast i preživljenje staničnih linija tumora glave i vrata u uvjetima in Vitro

U ovom smo radu istraživali učinak tretmana stanica tumora glave i vrata (HEp-2, CAL-27 i Detroit 562) citostaticima cisplatinom i metotreksatom u kombinaciji s povećanom ekspresijom gena p53, odnosno p21WAF1/CIP1 u uvjetima in vitro. Pratili smo vijabilnost stanica, proliferaciju te učinak na stanični ciklus i apoptozu. Gene p53 i p21WAF1/CIP1 unosili smo u stanice pomoću adenovirusnih vektora (Ad-p53, Ad-p21). U radu smo koristili metode: MTT-test, protočnu citometriju, analizu ekspresije gena pomoću DNK-čipova, RT- PCR, imunocitokemiju, Western blot analizu te metode proteomike. Rezultati istraživanja pokazali su da je kombinirani tretman tumorskih stanica citostaticima i Ad-p53 bio učinkovitiji od zasebnih tretmana. Posebnu pažnju posvetili smo objašnjenju dvostruke uloge gena p21WAF1/CIP1 u apoptozi neovisnoj o genu p53 prateći ekspresiju 96 gena ukljućenih u regulaciju apoptoze (DNK-čip), a kako bismo dodatno razjasnili mehanizme aktivacije/represije apoptoze izazvane genom p21. Kombinirani tretman citostaticima i Ad-p21 tako je pojačao učinak cisplatine na HEp-2 dokidanjem ekspresije gena GADD45a što je pojačalo apoptozu induciranu preko receptora Fas/TRAIL, te smanjio učinak metotreksata na HEp-2 smanjenom ekspresijom gena DFFB, GADD45a i BIK.

apoptoza; cisplatina; DNA-čip; gen p21WAF1/CIP1; gen p53; gensko liječenje; metotreksat; BIK; GADD45a

Ova je disertacija izrađena u Institutu Ruđer Bošković Zagreb, Zavodu za molekularnu medicinu pod vodstvom dr. sci. Marijete Kralj (izvjestitelj prof. dr. sci. Biserka Nagy) u sklopu Sveučilišnoga poslijediplomskog studija pri Biološkom odsjeku Prirodoslovno-matematičkoga fakulteta Sveučilišta u Zagrebu. Ocjenjivači: Prof. dr. sci. Biserka Nagy, red. prof., PMF ; Prof. dr. sci. Branko Vitale, zn. savj., IRB ; Dr. sci. Marijeta Kralj, zn.sur., IRB