hrvatski

Sfingomijelinski put prijenosa signala kao mehanizam indukcije apoptoze u tumorskim stanicama izloženim inhalalcijskim aesteticima

Cilj rada bio je odrediti učinak jednokratnog izlaganja stanica ljudskog karcinoma debelog crijeva (Caco-2) i karcinoma grkljana HEp-2 inhalacijskim anesteticima sevofluranu i halotanu. Materijal i metode: Stanice su uzgojene u monosloju na 37 °C u ovlaženoj atmosferi s 5% CO2 te izložene sevofluranu 3 vol % i halotanu 1, 5 vol % u smjesi anestezijskih plinova O2:N2O:CO2 (35:60:5 vol. %) u trajanju 1 i 2 sata. Jedna skupina stanica nakon izlaganja inhalacijskom anestetiku je analizirana isti dan, a druga je nakon izlaganja ostavljena u CO2 inkubatoru i analizirana nakon 24 sata. Stanična smrt ispitana je metodom protočne citometrije. Ispitana je ekspresija gena GAPDH, p53, kaspaza 3 i CYP 2E1 metodom RT-PCR. Fluorometrijskom metodom ispitana je enzimska aktivnost kaspaze 3, dok je aktivnost kisele i neutralne sfingomijelinaze mjerena razgradnjom [metil-14C] sfingomijelina. Nakon inkubacije s [3H]palmitinskom kiselinom, izolirana je iz ukupnih lipda frakcija u kojoj je de novo sinteza ceramida mjerena ugradnjom 3H. Svi dobiveni rezultati uspoređeni su s kontrolnim, netretiranim stanicama. Rezultati: Halotan i sevofluran doveli su do porasta broja apoptotičkih stanica , koji je bio najizraženiji 24 sata nakon izlaganja i iznosio 16, 9 % kod stanica izloženih sevofluranu u trajanju 2 sata. U stanicama Caco-2 porasla je ekspresija kaspaza 3 i CYP 2E1 gena nakon izlaganja sevofluranu, dok je opala ekspresija gena GAPDH. U stanicama HEp-2 je porasla ekspresija GAPDH gena a smanjena je ekspresija p53 i kaspaza 3 gena. Iako je postojao trend porasta katalitičke aktivnosti kaspaze 3, razlike nisu bile stastistički značajne u odnosu na kontrolnu skupinu. Smanjena je enzimska aktivnost neutralne i kisele sfingomijelinaze u stanicama Caco-2 i Hep-2 izloženim halotanu, dok je aktivnost sfingomijelinaze manje promijenjena u stanicama izloženim sevofluranu u odnosu na kontrolne stanica. Smanjenje de novo sinteze ceramida opaženo je u stanicama Caco-2 izloženim halotanu 1 i 2 sata, dok je porasla u stanicama HEp-2 izloženim sevofluranu nakon 24 sata. Zaključak: Inhalacijski anestetici, sevofluran i halotan utječu na sfingomijelinski signalni put već nakon kratkog izlaganja tumorskih stanica dobivenih iz tumora karcinoma debelog crijeva i karcinoma grkljana.

inhalacijski anestetici; tumorske stanice; mehanizam indukcije apoptoze; sfingomijelinski put

nije evidentirano