hrvatski

Karakterizacija 5'-fosfodiesteraze iz sladnih klica

U ovom radu je provedena karakterizacija potpuno pročišćene 5´-fosfodiesteraze, nakon što je ekstrahirana iz sladnih klica u Tris-HCl puferu pH 8, 9 te dalje pročišćena dijalizom, ionskom izmjenom i gel elektroforezom. Karakterizacija je provedena ispitivanjem utjecaja dvovalentnih kationa, EDTA i NaN3, temperature i pH vrijednosti na aktivnost enzma. Također je ispitivana supstratna specifičnost, kao i inhibicija produktima hidrolize, 5´-ribonukleotidima (5´-AMP, 5´-GMP, 5´-UMP, 5´-CMP i 5´-IMP). Potpuno pročišćeni enzim imao je pH optimum 8, 9, te je pokazao maksimalnu aktivnost pri 70 °C. Također je najveću aktivnost pokazao dodatkom 10 mM Mg2+ iona, dok su mu Zn2+, Cu2+ i Mn2+ ioni, EDTA i NaN3 smanjili aktivnost. Izolirana 5´-fosfodiesteraza je pokazala Km vrijednost 0, 28 mM za timidin 5´-monofosfat p-nitrofenil ester (supstrat za 5´-fosfodiesterazu). Nadalje, enzim je pokazao iznimnu sposobnost hidrolize RNA i jednolančane DNA, te vrlo slabi afinitet prema dvolančanoj DNA.

5'-fosfodiesteraza; sladne klice

126/05