hrvatski

Funkcionalna i strukturna svojstva gena SMO u tumorima kože

Ovim radom istražili smo aktivnost gena SMO u bazocelularnim tumorima, te aktivnost PTCH i GLI1, glavnih učesnika signalog puta Hh-Gli. U ovom signalnom putu najviše je istražen gen PTCH, a uloga gena SMO se godinama zanemarivala, jer se smatralo da on ima samo funkciju koreceptora. Istražili smo funkcionalnost gena SMO i njegovog proteinskog proizvoda metodom RT-PCR te s dvije imunokemijske metode. Razinu ekspresije gena PTCH, GLI1 i SMO istražili smo da bi dobili odgovor o njihovoj međusobnoj povezanosti. Gen ARP koristili smo kao kontrolni gen (housekeeping gen) u RT-PCR analizi. Dobiveni rezultati ukazuju da je gen SMO aktivan u svim tumorima za razliku od gena PTCH i GLI1. Pokazano je da od 8 ispitanih uzoraka RNA 4 zdrava tkiva nemaju ekspresiju ni u genu PTCH ni u geni GLI1. U istom broju tumorskih uzoraka povećanu ekspresiju PTCH i GLI1 našli smo u 6 uzoraka, a u dva smanjenu aktivnost. Povećana aktivnost PTCH prati povećanu aktivnost gena GLI1, odnosno smanjena aktivnost GLI1 prati smanjenu aktivnost PTCH što je karakteristično za Hh-Gli signalni put. Na razini proteina razvili smo imunohistokemijsku i imunofluorescencijsku metodu na presjecima tumorskog tkiva kože u uzorcima iz kojih smo izolirali i RNA. Pozitivna reakcija potvrđuje veću nazočnost proteina Smo u tumorskom tkivu. Paralelno za svaki uzorak radili smo rez zdravog tkiva iste osobe te napravili dvostruku provjeru same metode. Karakteristična pozitivna reakcija peroksidazom na bazalnom sloju ukazuje na bazocelularni karcinom kože. Ovi rezultati potvrđuju povećanu aktivnost na razini gena SMO. Pozitivno bojenje s Texas Red (crvena fluorescencija) bojom pokazuje pozitivnu reakciju na protein Smo kao i lokaciju proteina u stanici. Ovi postupci i metode će se koristiti u daljnjim pokusima u proučavanju mehanizama prijenosa signala u tumorima.

tumor kože; signalni put Hh-Gli; gen SMO; imunohistokemija; imunofluorescencija; PCR

nije evidentirano