hrvatski

Identifikacija papilomavirusa u dugogodišnje pohranjenim kondilomima metodom lančane reakcije polimerazom

Papilomavirusi čovjeka (HPV) posljednjih se godina intenzivno istražuju zbog povezanosti s raznim bolestima kože i spolnog sustava od kojih su neke čak zloćudne. Poznato je iz dosadašnjih istraživanja da su u kondilomima prisutni HPV tipovi 6 i 11, a da su HPV tipovi 16 i 18 najčešće povezani s oštećenjima genitalnog epitela, pretečama karcinoma. Cilj ovog rada bio je utvrditi prisutnost HPV i odrediti tip virusa u kondilomima koji su bili dugo godina zamrznuti (10 godina). Naime, pripremiti DNA iz takvih arhivskih uzoraka prvobitni je cilj, a zatim provjeriti da li je takav materijal još uvijek pogodan za detekciju HPV , etodom lančane reakcije polimerazom (PCR). U istraživanju koristili smo klasičnu metodu fenol/kloroform te precipitaciju etanolom za izolaciju DNA. Količina DNA u pohranjenim uzorcima bila je zadovoljavajuća, a istraživanja kvalitete pokazala su da je DNA zbog dugogodišnje pohrane u velikoj mjeri fragmentirana. Metodu PCR uz korištenje zajedničkih i tip-specifičnih početnica koristili smo za detekciju i genotipizaciju HPV kao i metodu cijepanja produkata reakcije PCR restrikcijskim enzimima (RFLP). Od 23 uzorka 20 ih je bilo pogodno za analizu metodom PCR, dok u tri uzorka to nije bilo moguće, vjerojatno zbog stupnja razgradnje DNA. U svih 20 uzoraka bila je prisutna DNA HPV (100%). Od toga je HPV 6 zastupljen u 45% uzoraka, HPV 11 u 15% uzoraka, HPV 16 u 10% uzoraka, a kod 35% uzoraka nismo odredili tip HPV. U jednom uzorku istovremeno su bili prisutni HPV 11 i HPV 16. Obzirom na dobivene rezultate može se zaključiti da je DNA iz dugogodišnje pohranjenih uzoraka uglavnom pogodna za analizu DNA HPV metodom PCR.

HPV; PCR; kondilomi

nije evidentirano