engleski

Cell cycle analysis of tumor cells using adenoviral vectors

Poremećaj regulacije staničnog ciklusa uzrokuje nekontroliranu proliferaciju stanica te je jedan od glavnih uzroka pojave raka. Postoji niz gena koji reguliraju stanični ciklus i čuvaju stanice od zloćudne preobrazbe, među kojima je gen p21WAF1/CIP1 čiji proteinski produkt je inhibitor kompleksa ciklin ovisne kinaze (cdk) i ciklina. Njegova povećana ekspresija u tumorskim stanicama predstavlja potencijalno oružje u genskom liječenju raka, međutim istraživanje njegove uloge ukazuje na niz kontradiktorinih rezultata zbog kojih je nužno dodatno rasvijetliti njegovu ulogu u tumorskim stanicama. U ovom je radu praćen utjecaj povećane ekspresije gena p21 unošenjem njegove cDNA replikacijski nesposobnim adenovirusnim vektorima (Ad5-p21) u tumorske stanice karcinoma debelog crijeva SW480 i SW620, koje potječu od istog pacijenta, ali imaju različit stupanj zloćudne preobrazbe. Kao kontrolni vektor je korišten adenovirus s ugrađenim genom dojavljivačem (Ad5-β gal). Oba vektora umnožena su visokoj koncentraciji u komplementirajućim stanicama, izolirana i pročišćena. Virusni titar je izmjeren određivanjem koncentracije ukupnih, ali i infektivnih virusnih čestica. Djelotvornost transdukcije stanica karcinoma debelog crijeva SW620, SW480, a i HCT116 adenovirusnim vektorom Ad5-β -gal određena je bojenjem na β -galaktozidaznu aktivnost. Uočena je slabija djelotvornost transdukcije SW620 stanica putem Ad5-β -gal u odnosu na SW480 i HCT116 stanice. Također je primijećeno toksično djelovanje samog vektora na tumorske stanice, poglavito na stanice SW620. Utjecaj Ad5-p21 i Ad5-β gal na stanični ciklus SW620 i SW480 stanica praćen je metodom protočne citometrije. Povećana ekspresija gena p21 izaziva zastoj u G1 fazi ciklusa stanica SW480. Njegova je uloga u stanicama SW620 upitna zbog snažnog utjecaja samog adenovirusnog vektora na stanični ciklus, budući da je uočen zastoj staničnog ciklusa u G2 fazi nakon zaražavanja stanica s kontrolnim vektorom Ad5-β gal. Kako i sami adenovirusni vektori mogu utjecati na stanični ciklus, te uzrokovati lažne rezultate, potreban je izuzetan oprez kod njihovog korištenja u istraživanju gena koji reguliraju stanični ciklus.

cell cycle ; p21 gene ; adenovirus ; cancer

nije evidentirano