Purin nukleozid fosforilaza iz bakterije Escherichia coli: Provjera modela katalitičkog djelovanja (CROSBI ID 543760)
Prilog sa skupa u zborniku | sažetak izlaganja sa skupa
Podaci o odgovornosti
Mikleušević, Goran ; Leščić Ašler, Ivana ; Luić, Marija ; Wielgus-Kutrowska, Beata ; Narczyk, Marta ; Bzowska, Agnieszka
hrvatski
Purin nukleozid fosforilaza iz bakterije Escherichia coli: Provjera modela katalitičkog djelovanja
Purin nukleozid fosforilaza (PNPaza) važan je enzim u metabolizmu purina u stanicama. PNPaza iz bakterije Escherichia coli posebno je zanimljiva, jer se pokazala dobrim kandidatom za gensku terapiju čvrstih tumora (Zhang Y. i sur., Curr. Top. Med. Chem 2005). Na osnovu kristalne strukture ternarnog kompleksa PNPaze iz E. coli s derivatima formicina A i fosfatnih odnosno sulfatnih iona, predložen je model mehanizma djelovanja ovog enzima (Koellner G. i sur., J. Mol. Biol. 2002). U svrhu njegove eksperimentalne provjere, pripremljeni su mutanti aktivnog mjesta: Asp204Ala, Asp204Asn, Arg24Ala, Arg217Ala te dvojni mutant D204A/R217A. Prekomjerno su eksprimirani u BL21 (DE3) bakterijskim stanicama E. coli, izolirani te pročišćeni do čistoće od ~ 99%. Preliminarna biofizička ispitivanja pokazuju da sve mutirane aminokiseline (Arg24, Asp204, Arg217) imaju važnu ulogu u katalitičkom djelovanju, jer se njihovom mutacijom u alanin aktivnost enzima prema prirodnim supstratima (Ino, Guo, Ado) smanjuje za najmanje sto puta, dok je aktivnost prema 7-metiliranom supstratu (m7Guo) tri puta veća od aktivnosti divljeg tipa. Ovo dokazuje ispravnost predloženog protoniranja na položaju N(7) purina (Koellner G. i sur., J. Mol. Biol. 2002). Preliminarni rezultati također ukazuju na zajedničko djelovanje aminokiselina Asp204 i Arg217 u procesu protoniranja s obzirom da dvojni mutant Asp204Ala/Arg217Ala pokazuje sličnu aktivnosti kao Asp204Ala mutant tj. jedna mutacija ima isti učinak kao i dvije.
PNPaza iz E. coli; mehanizam katalize
nije evidentirano
engleski
Escherichia coli purine nucleoside phosphorylase: Validation of catalytic mechanism
nije evidentirano
E. coli PNP; catalytic mechanism
nije evidentirano
Podaci o prilogu
38-38.
2008.
objavljeno
Podaci o matičnoj publikaciji
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj, Zbornik sažetaka
Zahradka, Ksenija ; Plohl, Miroslav ; Ambriović-Ristov, Andreja
Zagreb: Institut Ruđer Bošković
978-953-6690-78-7
Podaci o skupu
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj
poster
15.10.2008-18.10.2008
Zagreb, Hrvatska