hrvatski

Djelovanje okratoksina A i citrinina na razinu glutationa u bubrežnim stanicama (PK15)

Učinak citrinina (CIT) i okratoksina A (OTA) je ispitivan u epitelnim stanicama bubrega svinje (PK15). Mikotoksini su aplicirani pojedinačno i u kombinacijama tijekom 12 i 24 sata, kako bi se mogla pratiti stanična vijabilnost, smanjenje antioksidacijske sposobnosti stanice mjerenjem glutationa (GSH) te utvrditi tip interakcija dvaju mikotoksina (da li se radi o aditivnom, antagonističkom ili sinergističkom učinku). IC50 vrijednost se određuje bojenjem stanica pomoću tripan plavila, boje koja ima veći afinitet za mrtve (obojane plavo) nego za žive stanice (neobojene). Tako je inhibitorna koncentracija citrinina iznosila 67, 63 μ M, a okratoksina 17, 35 μ M. Pad stanične vijabilnosti na istu razinu (9%) se postiže koncentracijom CIT od 130 μ M, a OTA od 46 μ M. Razina reduciranog glutationa (GSH) određuje se spektrofotometrijski na plate-readeru na valnoj duljini 412 nm. Nakon tretiranja PK 15 stanica s OTA 6 i 10 μ M te CIT 30 i 50 μ M i njihovim kombinacijama tijekom 12 i 24 sata zaključuje se da je smanjenje GSH vremenski i o dozi ovisno. Pri izlaganju OTA u koncentraciji od 6 i 10 μ M razina GSH se neznatno smanjuje (za 4 i za 11%) u odnosu na kontrolu. Slični rezultati su dobiveni i nakon tretmana s CIT u koncentracijama 30 ili 50 μ M. Međutim, ovi mikotoksini znatno jače djeluju nakon 24 h jer se koncentracija GSH smanjila za 30 do 40% u odnosu na kontrolu. Nakon 12 h tretmana PK15 stanica kombinacijama OTA i CIT izmjerene vrijednosti GSH se statistički značajno ne razlikuju od očekivanih vrijednosti, što znači da prevladava aditivni učinak. Izuzetak je CIT 50μ M + OTA 6 μ M čija kombinacija uzrokuje sinergistički učinak, t.j. izmjerene vrijednosti su znatno manje od očekivanih. Nakon 24 h izlaganja aditivni učinak je zabilježen jedino u kombinaciji OTA 10 μ M + CIT 30μ M, dok je tretman s ostalim kombinacijama OTA i CIT rezultirao izmjerenim koncentracijama GSH znatno većim od očekivanih što se statističkom obradom bilježi kao antagonizam.

Okratoksin; citrinin; oksidativni stres; glutation

nije evidentirano