hrvatski

Mutageneza in vitro po Kunkelu

Ova metoda koristi se za uvođenje ciljane mutacije, odnosno promjene redoslijeda nukleotida u plazmidu ili u kloniranom odsječku DNA, a može se podijeliti u tri koraka. Najprije plazmid u koji se želi uvesti mutacija treba izdvojiti u jednolančanom obliku i to iz bakterije E. coli (dut- ung-). Navedeni genotip za posljedicu ima gubitak dUTPazne i uracil-deglikozidazne aktivnosti pa izdvojena plazmidna DNA osim adenina sadrži i uracil. Drugi korak obuhvaća in vitro sintezu komplementarnog lanca u prisutnosti uobičajenih deoksinukleotida pri čemu se kao početnica koristi oligonukleotid koji sadrži odgovarajuću mutaciju. U trećem koraku, ovako in vitro sintetizirana heterodupleksna DNA koristi se za transformaciju bakterije E. coli (dut+ ung+) te kao posljedica uracil deglikozidazne aktivnosti nastupa razgradnja lanca koji sadrži uracil i resinteza prema lancu koji sadrži željenu mutaciju.

in vitro mutageneza, Kunkel

nije evidentirano