hrvatski

Odstranjivanje limfocita T potiče osteoklastogenezu u kulturama mišje koštane srži

Da bi istražili ulogu limfocita T u osteoklastogenezi u miševa, odstranjivali smo subpopulacije limfocita T CD4+ i CD8+ in vivo, te smo zatim pratili razvoj osteoklasta in vitro. Odstranjivanje limfocita T provedeno je s pomoću mononklonskih protutijela , a učinkovitost odstranjivanja provjerena je 24 sata nakon injiciranja protutijela na protočnom citometru. Razvoj osteoklasta potaknut je 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 u kulturama koštane srži, te čimbenicima RANKL (engl. receptor activator of NFkapaB ligand) i M-CSF (engl. macrophage colony-stimulating factor)u kulturama koštane srži i stanica slezene. Broj razvijenih osteoklasta bio je dvostruko veći u kulturama stanica koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 miševa kojima su odstranjeni limfociti T u odnosu na kontrolne kulture. Nasuprot tome, između kultura stanica koštane srži i slezene potaknutim čimbenicima RANKL i M-CSF nije bilo razlike između miševa kojima su odstranjeni limfociti T i kontrolnih miševa. Prostaglandini su medijatori osteoklastogenetskog učinka odstranjenja limfocita T, s obzirom da je koncentracija prostaglandina E2 bila oko 5 puta veća u mediju kultura koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 miševa kojima su odstranjeni limfociti T u odnosu na kontrolne kulture. Indometacin, inhibitor sinteze prostaglandina ukinuo je poticajno djelovanje odstranjenja limfocita T na osteoklastogenezu. Postupkom RT-PCR, dobiveno je dvostruko povećanje izražaja gena za RANKL i gotovo potpuna inhibicija izražaja gena za osteoprotegerin u kulturama koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 miševa kojima su odstranjeni limfociti T u odnosu na kontrolne kulture. Također dobiveno je blago pojačanje izražaja gena za IL-1alfa u kulturama koštane srži potaknutim 1, 25-(OH)2 vitaminom D3 miševa kojima su odstranjeni limfociti T, ali nije bilo razlike u broju osteoklasta između miševa s izbačenim genom za IL-1-receptor tip I i konbtrolnih miševa. Stoga smo zaključili da IL-1 nije ključni čimbenik osteoklastogenetskog učinka odstranjenja limfocita T. Naši rezultati pokazuju da odstranjivanje limfocita T povećava broj osteoklasta putem poticanja sinteze prostaglandina, što zaztim uzrokuje recipročne promjene u izražaju gena za RANKL i osteoprotegerin. Iz tog se može zaključiti da limfociti T djeluju kao negativni regulatori osteoklastogeneze i to putem regulacije produkata stromalnih stanica.

limfociti T; osteoklasti; diferencija stanica; citokini

nije evidentirano