hrvatski

Određivanje kritičnih parametara u metodi titracije virusa rubele

Test titracije virusa rubele jest biološki test koji se temelji na upotrebi stanične kulture. Koristi se u kontroli kvalitete virusnih cjepiva gdje se određuje količina virusa rubele, izražena kao titar, bilo u međuproizvodu ili gotovom liofiliziranom cjepivu. U mikrotitarskoj pločici pripremljen je monosloj prijemčive stanične kulture koja se inficira serijskim razrjeđenjima virusa, te se prati progresivno nastajanje citopatskog učinka. Kao i svaki test koji uključuje biološki materijal, test titracije virusa rubele (RuV) sklon je varijacijama. Da bi revidirali standardni operativni postupak i pri tome unaprijedili fleksibilnost pri izvođenju testa, testirali smo robusnost testa titracije virusa rubele. Identificirali smo ukupno 7 operativnih parametara koji mogu varirati kod izvođenja testa, te utjecati na njegov rezultat. Operativni parametri koji uključuju pripremu stanične kulture su: (1) pasaža stanica, (2) starost stanica u pasaži i (3) metoda pripreme monosloja stanične kulture u mikrotitarskoj pločici. Operativni uvjeti koji uključuju adsorpciju virusa na pripremljeni monosloj u pločici su: (4) vrijeme adsorpcije virusa, (5) temperatura inkubacije i (6) režim svjetla tijekom adsorpcije. Posljednji parametar (7) je period inkubacije tijekom provođenja testa. Identificirane operativne parametre postavili smo na dvije eksperimentalne razine za svih 7 odabranih parametara. U ovoj studiji primijenjen je reducirani faktorijalni dizajn (DOE) eksperimenata sa rezolucijom IV, odnosno pri čemu smo dobili specifikaciju za 16 eksperimenata. Efekt svakog pojedinog faktora je uspoređen sa cjelokupnom varijabilnosti testa svih eksperimenata i sa zahtjevima Europske farmakopeje (Eu.Ph.) za test titracije virusa rubele. Ovom studijom pokazali smo da 6 od 7 faktora nema utjecaja na varijabilnost testa. Efekt preostalog faktora (metoda pripreme stanica u pločici) je minoran ali zamjetan i značajno manji od zahtjeva koji za varijabilnost testa predlaže Europska farmakopeja. Testiranjem robusnosti pomoću DOE pokazali smo da je metoda titracije virusa rubele robusna i da se može izvoditi unutar svih uvjeta koje smo ispitivali u ovoj studiji. Senzitivnost i reproducibilnost testa moguće je unaprijediti fiksiranjem izvođenja testa na višem nivou 3 faktora – metoda pripreme staničnog monosloja u pločici.

Validacija metode titracije virusa; Cjepivo protiv rubele; Multifaktorski dizajn eksperimenata; Robustnost

nije evidentirano