hrvatski

Kristalizacija kloro-derivata goveđeg inzulina

Inzulin je protein kojeg proizvode beta-stanice Langerhansovih otočića gušterače. Njegova uloga u ljudskom organizmu je kontrola razine glukoze u krvi. Svrha ovog rada bila je naći uvjete pri kojima nastaju jedinični kristali cinkovog(II) kloro derivata goveđeg inzulina metodom difuzija para viseće kapi. Svaki protein je jedinstven, stoga se parametri pogodni za kristalizaciju određuju posebno za svaki protein. Na uspješnost kristalizacije utječu različiti faktori, kao što je pH vrijednost pufera, temperatura, vrijeme rasta kristala, vibracije i zvuk, dodani ligand i koncentracija proteina. Tako je promjena pH vrijednosti od 0, 1 dovoljna da zaustavi kristalizaciju. Za neke proteine kristalizacija se događa preko širokog raspona pH vrijednosti, no u pravilu unutar jedne pH jedinice. Temperatura je drugi važan parametar za uspješnu kristalizaciju proteina. Većina kristalizira pri temperaturama od 4 °C ili 18-24 °C. Vrijeme potrebno za kristalizaciju monokristala može varirati u rasponu od nekoliko sati do nekoliko godina. Brzina rasta kristala je funkcija prezasićenosti, pa tako veliki kristali s minimalnim defektima nastaju kod nižeg prezasićenja i manje brzine rasta. Koncentraciju proteina povezujemo s prezasićenjem. Smanjenje koncentracije proteina usporava rast i javljaju se monokristali. Kristalizaciju je najbolje izvesti u rasponu koncentracije proteina od 3 do 10 mg cm-3. Za dobivanje monokristala pripremljena matičnica mora mirovati nekoliko dana ili tjedana u potpunoj tišini jer vibracije i zvukovi negativno utječu na sam rast. Kristali cinkovog(II) kloro derivata dobiveni su vrlo brzo (za sedam dana), a za njihovu uspješnu kristalizaciju određeni su uvjeti: množinska koncentracija NaCl iznosila je između 1, 25 i 2, 00 mol dm-3, cinkovog acetata između 0, 022 i 0, 045 mol dm-3, te koncentracija pufera (natrijev citrat dihidrat) 1, 0 mol dm-3, čija je pH vrijednost podešena na 6, 4. Početna koncentracija proteina bila je 3 mg cm-3, a protein je bio otopljen u 0, 02 mol dm-3 otopini klorovodične kiseline. Time smo ispitali utjecaj koncentracije soli i koncentracije proteina na kristalizaciju. Temperatura kristalizacije je bila 20 °C.

kristalizacija ; inzulin ; protein

nije evidentirano