hrvatski

Primjena tehnike lančane reakcije polimeraze (PCR) u identifikaciji genotipa za MRE11 gen u vrste Arabidopsis thaliana

Promjene izazvane insercijskom mutagenezom ne moraju biti fenotipski vidljive, pa se selekcija dobivenih transformata može vršiti primjenom nekih od selektivnih podloga koje sadrže antibiotike i/ili herbicide. U nekim situacijama, međutim, dolazi do utišavanja gena za rezistenciju na antibiotike ili herbidice smještenih na T-DNA. Zato je najsigurnija metoda identifikacije ona temeljena na PCR tehnici. Tom tehnikom uspješno se može dokazati segment T-DNA u mutiranom alelu. Divlji tip alela dat će drugačiji PCR produkt. Heterozigotne jedinke dat će PCR tehnikom oba PCR produkta: divlji tip i mutirani tip alela. U ovom radu istraživana je mutantna linije MRE11-3+/- s T-DNA insercijom u 9. intronu. Budući su recesivni homozigoti za mutantni alel MRE11-3-/- sterilni te ne stvaraju sjemenke, jedini način njihovog stvaranja je putem samooplodnje jedinki heterozigotnih za mutirani alel MRE11-3+/-. Samooplodnjom heterozigotne jedinke nastaje potomstvo u fenotipskom omjeru 3:1 (divlji tip : mutanti) i genotipskom omjeru 1(dominantni homozigoti): 2 (heterozigoti) :1(recesivni homozigoti). PCR tehnikom napravljena je genotipizacija jedinki potomaka heterozigota MRE11-3+/-. Dobiveni rezultati testirani su Hi- kvadrat testom i time je potvrđeno njihovo nasljeđivanje prema I. Mendelovom zakonu

Arabidopsis thaliana; MRE11; PCR genotipizacija; Mendelovi zakoni

nije evidentirano