hrvatski

Istraživanje kemijske reaktivnosti metalotioneina

Kemijska reaktivnost metalotioneina ispitana je u svrhu određivanja koncentracijskih konstanti stabilnosti, te kapaciteta metalotioneina (MT) za kompleksiranje kadmija. Primjena elektrokemijskih tehnika u ovim istraživanjima ima izuzetnu prednost zbog toga što elektrokemijski signal ovisi o onim veličinama o kojima ovise brzina i doseg kemijske reakcije, a to su koncentracija reaktanata, difuzijski koeficijenti kemijskih oblika, konstante ravnoteže i konstante brzine nastajanja odnosno disocijacije određenih kemijskih oblika. Za ostvarenje ovih ciljeva korišteni su komercijalno dostupni metalotionein zečje jetre i metalotioneinski fragment mišje jetre, te metalotioneinske frakcije izolirane i pročišćene iz tkiva dagnje, Mytilus galloprovincialis. Pri amperometrijskim titracijama MT sa Cd^2+ u otopini NaCl (0,59 mol dm^-3, pH = 7,9; 25 °C) koje su praćene tehnikom DPASV zabilježeni su specifični anodni signali kod potencijala od oko -0,67 V prema potencijalu referentne elektrode (Ag/AgCl, sat. KCl). Nastajanje kompleksa Cd(MT) direktno se prati mjerenjem povećanja visine specifičnih anodnih signala. Pri tome se iz uzoraka mora ukloniti ditiotreitol (DTT), dodan kao reducens pri izolaciji, jer se DTT natječe kao ligand za ione Cd^2+ i "maskira" nastajanje kompleksa Cd(MT). Na temelju podataka amperometrijskih titracija mjerenih tehnikom DPASV, i to modificiranom metodom van den Berg-Ružić-Lee, određena su kompleksirajuća svojstva metalotioneina. Linearna ovisnost I_Cdion/I_Cd(MT) prema [Cd]_ion upućuje da se interakcija između iona Cd^2+ i molekula metalotioneina ostvaruje preko jednog tipa funkcijskih skupina, tj. preko SH-skupina cisteina. Kapacitet kompleksiranja (c_L) može se odrediti s većom točnošću nego konstanta stabilnosti (K') kompleksa Cd(MT) zbog načina obradbe signala i propagacije pogreške.

diferencijalna pulsna voltametrija anodnog otapanja (DPASV); kadmij; kapacitet kompleksiranja; kompleks kadmij-metalotionein; koncentracijske konstante stabilnosti; metalotioneini

nije evidentirano