hrvatski

Razvoj spektrometrijskih i potenciometrijksih metoda određivanja tiola u laboratorijskim i realnim uzorcima

U ovom radu opisana je optimizacija i primjena pet novih metoda određivanja tiola (L-cistein, CIS, N-acetil-L-cistein, NAC, D-penicilamin, PEN, D-glutation, GLU) u farmaceutskim pripravcima. Kod razvoja ovih metoda rabljene su sljedeće tehnike: potenciometrija, spektrofotometrija u UV-Vis području, slijedna analiza injektiranjem (Sequential Injection Analysis, SIA) i atomska apsorpcijska spektrometrija s elektrotoplinskom atomizacijom. Primjenom jodid-ion indikatorske elektrode optimizirana je kinetička potenciometrijska metoda određivanja tiola temeljem reakcije stvaranja teško topljivog taloga (RSAg) između tiola (RSH) i iona Ag+. Pri odabranim optimalnim uvjetima ostvarena je linearnost u području koncentracija od 1, 0×10-5 do 1, 0×10-3 mol L-1. Eksperimentalno utvrđene granice dokazivanja za pojedine tiole iznose: 5, 0×10-6 mol L-1 za NAC, 5, 5×10-6 mol L-1 za GLU, 5, 6×10-6 mol L-1 za PEN, te 8, 9×10-6 mol L-1 za CIS. Uz primjenu elektrokemijskog članaka s komercijalnom jodid-ion indikatorskom elektrodom razvijena je i optimizirana metoda određivanja D-penicilamina i N-acetil-L-cisteina temeljem redoks reakcije s jodatom uz prisutnost male količine jodida. Ostvarena je prihvatljiva linearnost između promjene potencijala, E, i negativnog logaritma koncentracija odabranih tiola u području od 1, 0×10-6 do 1, 0×10-4 mol L-1. Pri odabranim optimalnim uvjetima eksperimentalno su određene granice dokazivanja: 9, 0×10-8 mol L-1 za PEN i 1, 0×10-7 mol L-1 za NAC. Primjenom spektrofotometrijskog detektora optimizirana je ranije studirana kinetička metoda određivanja tiola i askorbinske kiseline (AK). Apsorbancija Fe(II)-fenantrolin kompleksa, koji nastaje u reakciji s Fe(III)-fenantrolin kompleksom s tiolom ili AK, je kontinuirano mjerena pri valnoj duljini 510 nm. Neki tioli određeni su uz katalitički utjecaj iona Cu(II). Korišten je UV-Vis spektrofotometar s protočnom kivetom volumena 500 L. Pri odabranim optimalnim uvjetima ostvarena je linearna ovisnost apsorbancije o koncentracijama u području od 4, 0×10-6 do 4, 0×10-5 mol L-1 za AK i od 8, 0×10-6 do 8, 0×10-5 mol L-1 za tiole. Osnovne prednosti sustava za slijednu analizu injektiranjem iskorištene su za razvoj spektrofotometrijske metode temeljene na nastajanju stabilnog kompleksa između penicilamina i iona Ni(II). U postupku razvoja metode optimizirani su uvjeti nastajanja kompleksa u protoku i odabrane osnovne odrednice protočnog sustava koje omogućuju pouzdano određivanje PEN u koncentracijskom području od 3, 0 ×10-6 do 5, 0×10-4 mol L-1. U sustav SIA injektirani su sljedovi otopine Ni(II) (50L) i otopine PEN (300 L), te potom uz protok 1500 L min-1 usmjereni prema detektoru s protočnom kivetom. Apsorbancija je mjerena pri  = 270 nm. Optimizirane varijable protočnog sustava omogućavaju određivanje nanomolarnih količina PEN (≥ 0, 9 nmol) uz dinamiku mjerenja od 200 uzoraka u vremenu od 60 minuta. Atomska apsorpcijska spektrometrija primijenjena je za razvoj indirektne metode određivanja PEN temeljem reakcije nastajanja kompleksa između odabranog tiola i iona Ag+. Višak iona Ag+, koji nisu vezani u kompleks, izdvojeni su iz reakcijske otopine adsorpcijom na kation-izmjenjivačku smolu Amberlite IR 120. Nakon razrjeđenja reakcijske otopine u 0, 2 % HNO3 mjerena je integrirana apsorbancija korištenjem atomskog apsorpcijskog spektrometra s elektrotoplinskom atomizacijom. Ostvarena je linearna ovisnost između integrirane apsorbancije i koncentracije PEN u području od 10, 0 do 70, 0 g mL-1. Određene su granica dokazivanja, 5, 26 g mL-1, i granica određivanja, 7, 19 g mL-1. Ispitani su uvjeti nastajanja kompleksa i vezanja iona Ag+ na Amberlite IR 120. Nadalje, optimiziran je temperaturni slijed zagrijavanja grafitne kivete i odabrane optimalne koncentracije modifikatora matrice. U postupku razvoja predloženih metoda ispitan je utjecaj mogućih interferencija, te su ostvarene dobre analitičke iskoristivosti pri određivanju odabranih tiola u komercijalno dostupnim farmaceutskim pripravcima.

tioli; potenciometrija; UV-Vis spektrofotometrija; atomska apsorpcijska spektrometrija s elektrotoplinskom atomizacijom; slijedna analiza injektiranjem

nije evidentirano