hrvatski

Dipeptidil-peptidaza III iz bakterije Bacteroides thetaiotaomicron: izolacija i karakterizacija

Kodirajuća DNA za enzim dipeptidil-peptidazu III (DPP III) bakterije Bacteroides thetaiotaomicron prekomjerno je eksprimirana u bakteriji Escherichia coli, a rekombinantni protein pročišćen pomoću kromatografije na stupcu hidroksiapatita, gel-filtracije na Sephacrylu S- 200 i brze tekućinske kromatografije proteina (FPLC). Pročišćenoj DPP III određena je relativna molekulska masa (72 100) SDS-elektroforezom, a nativnom elektroforezom i izoelektričnim fokusiranjem je utvrđeno da se pojavljuje u dvije forme proteina različitih izoelektričnih točaka (kod pH 5, 0 i 5, 2). Ispitan je niz sintetskih supstrata (amino)peptidaza i ustanovljeno da izolirani enzim (obje forme) pokazuje značajnu hidrolitičku aktivnost samo prema Arg-Arg-2- naftilamidu, karakterističnom supstratu DPP III. Također je određena temperaturna stabilnost (do 37 ˚C) i optimum (40-45 ˚C), te optimalni pH djelovanja (7, 5-8, 0) pročišćenog enzima. Potpuna inhibicija DPP III postignuta je uz kelatore metala i sulfhidrilni reagens p- hidroksimerkuribenzoat. Značajna aktivacija DPP III postignuta je dodavanjem iona Co2+u reakcijsku smjesu.

dipeptidil-peptidaza ; Bacteroides thetaiotaomicron ; metalopeptidaza

nije evidentirano