hrvatski

Rekloniranje i ekspresija različito obilježenog gena ssb-s iz bakterije Streptomyces coelicolor

SSB proteini imaju bitnu ulogu u staničnim procesima DNA metabolizma: štite i stabiliziraju jednolančanu DNA, rade interakcije s nizom proteinima koji sudjeluju u istim staničnim procesima te pritom tom moduliraju njihove aktivnosti. Cilj rada bio je načiniti dva genetička konstrukta ssb-s gena dodajući različite DNA kodirajuće nizove na 5' kraj gena. Za ispitivanje poslijetranslacijske modifikacije SSB-S proteina, genu ssb-s su dodani kodoni za šest histidina na 5' kraju kako bi se metodom Ni2+ afinitetne kromatografije obilježeni protein jednostavno izdvajao iz staničnog lizata. Gen je uspješno modificiran i Western analizom dokazana je uspješna sinteza ovakvog proteina u homolognom domaćinu, bakteriji S. coelicolor. Kako bi se identificirali proteini koji u stanicama rade interakcije s SSB-S proteinom genu ssb-s je dodan nukleotidni slijed koji kodira za TAP-tag (ProteinA-Kalmodulin vezujući protein) na 5' kraju. Sekvencioniranjem je potvrđena genetička konstrukcija, gen je subkloniran u streptomicetni ekspresijski vektor. transformiran u svoju ishodnu bakteriju, gdje mu je PCR reakcijom dokazana prisutnost.

ssb-s gen; SSB-S protein; Streptomyces coelicolor

nije evidentirano