hrvatski

Molekularna i funkcionalna karakterizacija GDS(L) lipaza iz bakterija Streptomyces rimosus i Streptomyces coelicolor

U sklopu ove doktorske disertacije načinjena su opsežna istraživanja streptomicetnih GDS(L) lipaza, s modelnim enzimima SrL iz bakterije S. rimosus i Sc1L iz bakterije S. coelicolor. Razvijeni su sustavi za biosintezu lipaza u streptomicetima i bakteriji E. coli. N-terminalno dodani tioredoksin A omogućio je biosintezu aktivne SrL u citoplazmi bakterije E. coli. Nadalje, utvrđene su aminokiseline ključne za katalitičku aktivnost SrL enzima: Gly54 i Asn82 koje oblikuju oksianionsku šupljinu, te Ser10, Asn213 i His216 koje čine katalitičku trijadu. Ovo je prvi primjer da se na sačuvanom položaju umjesto aspartata nalazi asparagin, za koji je eksperimentalno potvrđeno da je važan u katalizi. Načinjena je fizičko-kemijska i biokemijska karakterizacija enzima, te je utvrđeno da Sc1L, za razliku od SrL, preferira supstrate dužih C-lanaca. Pretragom baza podataka, u svim analiziranim streptomicetnim genomima nađen je veći broj GDS(L) gena, do čak 17 kod biljnog patogena S. scabies. Rezultati filogenetske analize mogu poslužiti pri odabiru novih GDS(L) enzima za istraživanje i moguću primjenu.

GDS(L) lipaza; Streptomyces; ciljana mutageneza; biokemijska karakterizacija; filogenetska analiza

nije evidentirano