hrvatski

Određivanje koncentracije aminokiselina plinskom kromatografijom u uzorcima izuzetim tijekom biotehnološke proizvodnje mliječne kiseline

U ovom radu je opisan postupak derivatizacije amino- i karboksilnih grupa aminokiselina etilklorformijatom u vodenoj otopini. Nastali N(O, S)-alkoksikarbonil-alkil esteri ekstrahirani su iz vodene faze u organsku fazu - smjesu kloroforma i etil-klorformijata. U priređenim uzorcima optimiranom plinsko-kromatografskom metodom detektirano je ukupno 14 od 20 alkoksikarbonil-alkil estera aminokiselina Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Asn, Met, Pro, Lys, Asp i Glu. Ovom metodom ne mogu se detektirati Ser, Thr, Cys, Gln i Arg, dok je koncentracija His uglavnom bila ispod odgovarajuće LOD vrijednosti (0, 096 mmol/L). Opisana analitička metoda je precizna, točna, osjetljiva i robusna te je prikladna za određivanje koncentracije svih pobrojenih aminokiselina i iz hranjivih podloga kompleksnog sastava, koje se vrlo često koriste u istraživanju i biotehnološkoj proizvodnji. Primjenom ove metode utvrđeno je da sterilizacija vodenih otopina aminokiselina, koje potječu iz mesnog ekstrakta, kvaščevog ekstrakta i peptona - tri sastojka koji se često dodaju u hranjive podloge kao izvori dušika, utječe na njihovu koncentraciju. Određena je koncentracija aminokiselina i u uzorcima izuzetim tijekom biotehnološke proizvodnje mliječne kiseline u laboratorijskom bioreaktoru s miješalom šaržnim postupkom. Bioproces proizvodnje mliječne kiseline proveden je s pomoću dvije bakterije mliječne kiseline - Lactobacillus amylovorus DSM 20531T i Lactobacillus rhamnosus. Metabolizam glukoze i sinteza biomase kod amilolitičke bakterije mliječne kiseline L. amylovorus DSM 20531T znatno se razlikuje od pridobivanja i korištenja metaboličke energije kod L. rhamnosus, koji ne posjeduje amilolitičku aktivnost. Obje bakterije posjeduju proteolitičku aktivnost i, na temelju promjena izvanstaničnih koncentracija aminokiselina, može se zaključiti da je ova aktivnost intenzivnija kod L. rhamnosus. Rezultati ovog rada doprinijet će boljem razumijevanju fiziologije bakterija čija primjena se istražuje za proizvodnju mliječne kiseline visokoučinkovitim i održivim bioprocesom.

određivanje koncentracije aminokiselina; derivatizacija aminokiselina i ekstrakcija estera aminokiselina; plinska kromatografija; biotehnološkaproizvodnja mliječne kiseline; bakterije mliječne kiseline

nije evidentirano