Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom (CROSBI ID 368638)
Ocjenski rad | diplomski rad
Podaci o odgovornosti
Marasović, Mirela
Weygand-Đurašević, Ivana
Jarić, Jelena
hrvatski
Podjedinica H arhejske RNA-polimeraze: od kloniranja do istraživanja interakcije s atipičnom seril-tRNA-sintetazom
Interakcija podjedinice H arhejske RNA-polimeraze (RpoH) i seril-tRNA-sintetaze metanogenog tipa iz arheje Methanothermobacter thermautotrophicus (MtSerRS) detektirana je ranije u laboratoriju sustavom dvaju hibrida. Asocijacija MtSerRS:RpoH vrlo je zanimljiva budući da se radi o proteinima uključenim u proces koji je od vitalne važnosti za život stanice - ekspresiju gena. Funkcija arhejske RNA-polimeraze je transkripcija svih gena, dok MtSerRS aminoacilira tRNASer serinom te na taj način opskrbljuje ribosom supstratima za elongacijsku fazu translacije. U svrhu potvrde stvaranja kompleksa MtSerRS:RpoH tehnikama in vitro, bilo je potrebno pročistiti pojedine proteine u dovoljnim količinama. Zato je gen rpoH umnožen lančanom reakcijom polimeraze i ugrađen u vektor pod kontrolom jakog T7 promotora. Optimiran je sustav za prekomjernu ekspresiju i pročišćavanje RpoH iz bakterije E.coli, a zatim je RpoH pročišćen u preparativnoj količini. Također, prekomjerno je eksprimirana i pročišćena MtSerRS. Interakcija dvaju proteina istražena je gel-retardacijskom elektroforezom i supročišćavanjem kompleksa na koloni. Preliminarni rezultati dali su naznaku stvaranja kompleksa na nativnom gelu, međutim supročišćavanjem kompleksa na koloni asocijacija MtSerRS:RpoH nije detektirana.
arheje; Methanothermobacter thermoautotrophicus; seril-tRNA-sintetaza metanogenog tipa; podjedinica H arhejske RNA-polimeraze; gel-retardacijska elektroforeza; supročišćavanje kompleksa na koloni
nije evidentirano
engleski
Archaeal RNA polymerase subunit H: from cloning to investigation of interaction with atypical seryl-tRNA-synthetase
nije evidentirano
archaea; Methanothermobacter thermoautotrophicus; methanogenic-type seryl-tRNA synthetase; RNA polymerase subunit H; gel-retardation electrophoresis; pull-down assay
nije evidentirano
Podaci o izdanju
77
04.07.2011.
obranjeno
Podaci o ustanovi koja je dodijelila akademski stupanj
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
Zagreb