hrvatski

Utjecaj promjene primarne strukture acetilkolinesteraze na reverzibilnu inhibiciju piridinijevim oksimima

Za rekombinantne acetilkolinestarazu (AChE ; EC 3.1.1.7) i butirilkolinesterazu (BChE ; EC 3.1.1.8) miša divljeg tipa te za četiri mutanata AChE studirana je reverzibilna inhibicija oksimima K203 [(E)-1-(4-karbamilpiridinij)-4-(4- hidroksiiminometilpiridinij)-but-2-ene dibromid] i K117 [1, 1'-(2, 2'-oksibis(etan-2, 1-dil))bis(4- hidroksiiminometil piridinij) bromid]. Odabrani mutanti oponašaju aminokiseline u aktivnom mjestu BChE. Od jednostrukih mutacija mutant Y337A ima promijenjenu aminokiselinu na mjestu vezanja kolina, dok Y124Q ima promijenjenu aminokiselinu na perifernom mjestu. Dvostruki mutanti F295L/Y337A i F297I/Y337A imaju mutacije u acilnom džepu i u mjestu vezanja kolina. Eksperimentalni dio rada proveden je pomoću spektrofotometrijskog mjerenja aktivnosti enzima metodom po Ellmanu te su određene disocijacijske konstante inhibicije. Oba oksima K117 i K203 reverzibilno su inhibirali kolinesteraze i to dvostruko odnosno sedmerostruko jačim afinitetom za AChE nego za BChE. Približno jednako inhibiraju AChE w.t. (Ki(K117)=44 mol dm- 3 ; Ki(K203)=43 mol dm-3). Mutacija tirozina kolinskog mjesta u alanin omogućuje povoljne interakcije oksima unutar aktivnog mjesta te mutant Y337A ima najveći afinitet za vezanje K117 (22 mol dm-3) i K203 (12 mol dm-3). Vrijednosti disocijacijskih konstanti reverzibilne inhibicije za BChE w.t., Y124Q, F295L/Y337A i F297I/Y337A iznose 83, 88, 28, 83 mol dm-3 za K117, te 286, 307, 23, 66 mol dm-3 za K203. Mutant Y124Q za oba oksima ima sličan afinitet BChE w.t. što govori da oba oksima u AChE stabiliziraju interakcije s tirozinom 124 perifernog mjesta AChE.

acetilkolinesteraza ; butirilkolinesteraza ; oksimi ; reverzibilna inhibicija

nije evidentirano