engleski

Role of nitric oxide on blood-brain permeability in common carp (Cyprinus carpio L.)

Cilj je ovog istraživanja bio utvrditi djelovanje dušik (II) oksida (NO) na propusnost krvno-moždane barijere in vivo u šarana korištenjem gliceroltrinitrata kao donora NO. Ustanovili smo i vremenski odredili reverzibilnost procesa povećane propusnosti krvno-moždane barijere, pratili, opisali i vremenski determinirali razvoj moždanog edema te utvrdili sličnost mehanizma povećanja propusnosti krvno-moždane barijere u kojem sudjeluje NO na nižim kralježnjacima u odnosu na do sada istraživane vrste. Pokus je izveden na dvogodišnjoj šaranskoj mlađi (Cyprinus carpio L.) tretiranoj gliceriltrinitratom u dozi od 1 mg/kg tjelesne mase. U serumu životinja je u vremenskim razmacima od 0, 1, 3, 6, 8, 12 i 24 sata nakon tretmana određena koncentracija nitrita i nitrata komercijalnim kitom. Kontrolnoj skupini i tretiranim skupinama u vremenskim razmacima od 6, 12 i 24 sata nakon aplikacije GTN analizirana je propusnost krvno-moždane barijere temeljem istjecanja Evans plavila na makroskopskom uzorku mozga i mikroskopskim preparatima pomoću fluorecentnog mikroskopa. U vremenskim razmacima od 6 i 24 sata nakon tretmana metodom mjerenja «suhe-mokre tvari» odredili smo pojavu moždanog edema kojeg smo opisali na hemalaun-eozin obojenim preparatima mozga pod svjetlosnim mikroskopom. Ukupna koncentracija nitrita/nitrata pokazala je bifazičan obrazac s najvišim vrijednostima neposredno nakon aplikacije gliceroltrinitrata (0 sati), 188.1±23.82 mmol (srednja vrijednost±SD), i nakon 6 (236.4±64.67 mmol) i 8 sati (255.2±25.81 mmol). Dinamika promjene koncentracije nitrata odgovara ukupnoj koncentraciji nitrata i nitrita. Najviše su vrijednosti neposredno nakon aplikacije gliceroltrinitrata (0 sati), 180.2±25.76 mmol, te 6 (232.4±63.84 mmol) i 8 sati nakon aplikacije (236.9±89.12 mmol). Koncentracije nitrita su značajno niže od koncentracije nitrata, a maksimalne vrijednosti pokazuju nakon 3 (14.28±9.627 mmol) i 8 sati (16.17±5.935 mmol) od primjene donora NO. Svi dijelovi mozga životinja (prednji mozak, međumozak, srednji mozak, mali mozak i leđna moždina) u skupini koja je analizirana 6 sati nakon primjene GTN pokazale su stupanj obojenja „3“. Odgovarajući dijelovi mozga u kontrolnoj skupini i u skupinama koje su analizirane 12 i 24 sata nakon aplikacije donora NO pokazali su neobojenje, odnosno blago obojenje u područjima cirkumventrikularnih organa. Nalaz ukazuje na povećano propusnu krvno-moždanu barijeru 6 sati nakon primjene donorskog sredstva NO, dok u kontrolnoj skupini nije došlo do otvaranja krvno-moždane barijere, a u skupinama koje su analizirane 12 i 24 sata nakon aplikacije ponovno je došlo do njenog zatvaranja. Navedeni rezultati potvrđeni su metodom istjecanja Evans plavila koja se izvodi analiziranjem pod fluoresecntnim mikroskopom. Ispitivanje moždanog edema metodom mjerenja «suhe-mokre tvari» pokazalo je da mozak kontrolne skupine životinja ima 74.2% ± 0.038 (srednja vrijednost ± SD) vode, dok mozak skupina tretiranih gliceroltrinitratom pokazuje znakove edema, te nakon 6 sati ima 77.9% ± 0.024 vode, a nakon 24 sata 78.6% ± 0.022 vode, što je u obje tretirane skupine statistički značajno više u odnosu na kontrolnu skupinu. Ovi nalazi potvrđeni su i histološki opisani na preparatima obojenim hemalaun-eozinom, te analizirani pod svjetlosnim mikroskopom. Istraživanje je pokazalo da je aplikacija glicerotrinitrata kao donora dušik(II)oksida inducirala njegovu sintezu koja je vidljiva nakon 6 i 8 sati od aplikacije. Povećana sinteza NO povezana je s povećanom propusnošću krvno-moždane barijere u šarana u istom vremenskom intervalu od 6 sati nakon aplikacije donorskog sredstva. Nakon 12, a poglavito nakon 24 sata, krvno-moždana barijera se u potpunosti restituira, no i dalje ostaje moždani edem koji je jasno vidljiv i 24 sata nakon aplikacije gliceroltrinitrata. Iz rezultata navedenih istraživanja možemo zaključiti da aplikacija donora NO dovodi do reverzibilnog otvaranja krvno-moždane barijere i pojave moždanog edema u šarana, što je do sada dokazano i na nekim vrstama sisavaca.

blood-brain barrier; carp; glyceryltrinitrate; nitric oxide; brain edema

nije evidentirano