Genotipizacija CYP2D6 *3 i *4 mutacija metodom PCR-SSCP (CROSBI ID 479700)
Prilog sa skupa u zborniku | sažetak izlaganja sa skupa | domaća recenzija
Podaci o odgovornosti
Ivanišević, Ana-Maria ; Štefanović, Mario ; Topić, Elizabeta
hrvatski
Genotipizacija CYP2D6 *3 i *4 mutacija metodom PCR-SSCP
Single-Strand Conformation Polymorphism (SSCP) je metoda detekcije poznatih i nepoznatih mutacija koja se temelji na promjeni sekundarne strukture definiranog fragmenta jednolančane DNA. Cilj ovog rada je bio optimirati PCR-SSCP metodu detekcije CYP2D6 *3 and *4 mutacija korištenjem GMA gelova u Elchrom Scientific SEA 2000 elektroforetskom sustavu, opremljenim elementom za izmjenu topline i pumpom za laminarni protok, koji omogućuju održavanje jednolične temperature po čitavoj površini gela. PCR-SSCP analiza je izvedena na 45 uzoraka prethodno genotipiziranih metodom PCR-RFLP. Eksoni IV i V (*4 i *3 aleli) CYP2D6 gena su umnoženi i denaturirani na 95°C, 5 minuta. Napon je bio 45 V, a temperatura pufera 8°C tijekom noći (18 h). Naši rezultati pokazuju reproducibilne i uniformne obrasce vrpci na gelu za mutante i divlje tipove CYP2D6 *3 and *4 genotipova. Unutar skupine zdravih ispitanika za CYP2D6 *3 je pronađeno 2.0 % heterozigota i 98 % divljeg tipa, a za CYP2D6 *4 68.2 % divljeg tipa, 29.5 % heterozigota i 2.3 % homozigota. Svaki uzorak prethodno genotipiziran metodom PCR-RFLP jednoznačno je potvrđen metodom PCR-SSCP (100 % podudarnost). Zbog odličnih značajki GMA gelova i mogućnosti kontrole temperature u Elchrom Scientific SEA 2000 elektroforetskom sustavu metoda je pouzdana, jednostavna za izvođenje i ekonomski konkurentna.
CYP2D6; *3 and *4 mutations; PCR-SSCP
nije evidentirano
engleski
PCR-SSCP genotyping of CYP2D6 *3 and *4 mutations
nije evidentirano
CYP2D6; mutacije *3 i *4; PCR-SSCP
nije evidentirano
Podaci o prilogu
52-3-x.
1999.
nije evidentirano
objavljeno
Podaci o matičnoj publikaciji
Biochemia Medica, Sažeci Trećeg hrvatskog kongresa medicinskih biokemičara
Suchanek, Ernest
Zagreb: Hrvatsko društvo za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu (HDMBLM)
Podaci o skupu
Treči hrvatski kongres medicinskih biokemičara
poster
22.09.1999-25.09.1999
Vukovar, Hrvatska