hrvatski

Evaluacija real-time PCR metode za izravnu identifikaciju mikobakterija u kliničkim uzorcima

Učinkovitost PCR metoda za direktnu identifikaciju mikobakterija postaje vrlo zanimljivo područje. novija istraživanja utvrdil su smanjenu uspješnost identifikacije kada se PCR metoda primjenjuje na uzorcima iskašljaja s malim brojem prisutnih acidorezistentnih bacila (1+) u mikroskopskom preparatu. Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi da li bi PCR bilo opravdano raditi samo na mikroskopski pozitivnim kliničkim uzorcima visokog pozitiviteta (2+ i 3+). istraživanje je provedeno u Kliničkom bolničkom centru zagreb. real-time PCR metoda koja razlikuje mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) i ostale Mycobacterium spp. napravljena je na mikroskopski pozitivnim kliničkim uzorcima. Dobiveni rezultti evaluirani su u odnosu na intenzitet pozitiviteta mikroskopskog preparata (1+, 2+ i 3+). osim molekularnih korištene su i konvencionalne metode (bojanje auraminom, te kultivacij mikobakterija na krutim i tekućim hranjivim podlogama). od ukupno 52 mikroskopki pozitivn klinička uzorka (33 iskašljaja, 12 bronhoalveolarnih lavata, 6 bronhalnih aspirta i 1 pleuralni izljev), u 51 uzorku je u kulturi porastao MTBC, a u 1 netuberkulozna mikobakterija (NTM). PCR je iamo 100%-tnu uspješnost identifikacije kod uzorka s mikroskopskim pozitivitetom 2+ i 3+, dok je identifikacija bila uspješna kod svega 14 od 27 (52%) uzoraka s pozitivitetom 1+. Točna identifikacija mikobakterija u kliničkim uzorcima bila je manje uspješna kod uzoraka s niskim mikroskopskim pozitivitetom. naše istraživanje potvrdilo je zapažanja da uspješnost PCR metode ovisi o količini mikobakterija prisutnih u kliničkom uzorku. Stog PCR nije dovoljno pouzdan d bi se njime isključila dijagnoza tuberkuloze kod paucibacilarne plućne tuberkuloze, ali ga svakako treba koristiti kod kliničkih uzoraka s visokim pozitivitetom zbog brzog utvrđivanja dijagnoze. potrebna su daljnja istraživanja kako bi se potvrdilo da za optimalnu učinkovitost (odnos cijena-korist) PCR metode treba raditi samo na kliničkim uzorcima visokog pozitiviteta (2+ i 3+)

real-time PCR; mikobakterije; identifikacija

nije evidentirano