hrvatski

Uspostavljanje metode i određivanje čimbenika za nastanak crRNA u bakteriji Escherichia coli

Nedavno je otkriven sustav CRISPR/Cas za obranu bakterija od stranih genetičkih elemenata. Mehanizam obrane još uvijek nije u potpunosti razjašnjen, a može se podijeliti u tri faze. U bakteriji Escherichia coli za obranu su neophodni ribonukleoproteinski kompleks Cascade i protein Cas3. Sustav CRISPR/Cas u E. coli normalno nije aktivan, a poznato je nekoliko čimbenika koji utječu na njegovu aktivnost. U ovom radu istražen je utjecaj temperature te proteina H-NS, RNazaHI, Cas3 i CasC na nastajanje i stabilnost transkripata regije CRISPR. Za tu svrhu uspostavljene su metode neradioaktivni Northern blot i dot blot. Prema dobivenim rezultatima može se zaključiti da snižena temperatura inkubacije bakterija nema utjecaj na stabilnost transkripata regije CRISPR. Protein H-NS služi kao negativni regulator sustava, a nedostatak enzima RNazaHI nema pozitivan utjecaj na obranu bakterija. Proteini Cas3 i CasC nisu potrebni za nastajanje crRNA, odnosno ne utječu na procesiranje pre-crRNA. Nema korelacije između količine crRNA i efikasnosti obrane.

CRISPR/Cas; temperatura; H-NS; Rnaza HI; Cas3

nije evidentirano