hrvatski

Sinteza fragmenata DNA za inaktivaciju gena RAD27 lančanom reakcijom polimerazom

Cilj ovoga rada je umnaţanje linearnog fragmenta DNA rad27::kanMX4 lančanom reakcijom polimerazom iz kvasca Saccharomyces cerevisiae. Fragment rad27::kanMX4 se zahvaljujući krajevima homolognima dijelu gena RAD27 i selektivnom biljegu kanMX4 moţe koristiti za inaktivaciju gena RAD27 u drugim sojevima kvasca mehanizmom rekombinacije „end-out“ (zamjena gena). Nakon izolacije genomske DNA kvasca, provedena je gel- elektroforeza radi provjere uspješnosti izolacije te je izolirana DNA posluţila kao kalup za sintezu fragmenta lančanom reakcijom polimerazom. Gel- elektroforezom provjerena je uspješnost sinteze fragmenta, a struktura umnoţenog fragmenta provjerena je restrikcijskom analizom pomoću tri restrikcijska enzima. Veličina dobivenih fragmenata nakon cijepanja restrikcijskim enzimima bila je u skladu s restrikcijskom mapom fragmenta rad27::kanMX4.

Saccharomyces cerevisiae; lančana reakcija polimerazom; homologna rekombinacija; zamjena gena.

nije evidentirano